文档介绍：华中科技大学
博士学位论文
CpG ODN对Con A诱导的小鼠肝损伤保护作用的研究
姓名:张惠
申请学位级别:博士
专业:免疫学
指导教师:龚非力
20090501
华中科技大学博士学位论文
CpG ODN 对 ConA 诱导的小鼠肝损伤保护作用的研究
博士研究生: 张惠
导师: 龚非力教授
华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学教研室
中文摘要

病毒性肝炎、药物性肝损害、自身免疫性肝炎、肝硬化及肝癌等肝病已成为世界
范围内威胁人群健康的主要疾病之一。已有研究表明,肝炎病毒并非直接导致细胞病
理性改变,而主要是通过诱导宿主产生针对病毒感染肝细胞的免疫应答,继而损伤肝脏
细胞。
炎症是不同类型急性和慢性肝病普遍存在的病理现象,它与进行性肝脏损伤和肝
组织纤维化有关。现已发现,固有免疫系统的各类细胞通过模式识别受体(pattern
recognition receptors,PRR)识别病原微生物,从而被活化,参与启动和维持肝脏炎
症过程。这些固有免疫细胞中,树突状细胞可通过处理、加工和提呈抗原而引起适应
性 T 细胞应答;活化的 kupffer 细胞、募集到肝脏的巨噬细胞及其他炎症细胞可产生
大量细胞因子、趋化因子,引起炎症反应反复发生和肝细胞损伤。
TLR(Toll-like receptor)是一类重要的 PRR,因其与果蝇 Toll 蛋白家族在结构上
具有同源性而得名,TLR 通过识别不同病原微生物的 PAMP (pathogen associated
molecular partern)在抗感染固有免疫中发挥重要作用。其中,表达于细胞内 TLR9 通
过识别细菌和病毒 DNA 中的非甲基化 CpG 基序或人工合成的脱氧寡核糖核酸
(CpG-containing oligodeoxynucleotides ,CpG ODNs)序列而被活化,继而促进 B 细
胞增殖、分化,促进 DC 成熟,上调共刺激分子表达,并诱导 Th1 细胞应答。
目前已知有3种CpG ODN,即D-型(A-class)、K-型(B-class)及C-型,三者结构中
均含非甲基化CpG二核苷酸序列,且因结构各异而具有不同生物学功能。CpG ODNs
已被用于治疗某些感染性疾病、肿瘤及变态反应性疾病等。
本课题研究目标为:建立 Con A 诱导的小鼠肝损伤模型,观察不同给药时间、不
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同剂量 CpG ODN 对肝损伤的影响;用 CpG ODN 100μg 预处理小鼠 3h,初步探讨 CpG
ODN 对 Con A 诱导肝损伤的保护作用及其机制。

一、CpG ODN 对 ConA 诱导肝损伤的影响
(一)实验分组
PBS 正常对照组(PBS 组)
PBS 预处理组(PBS/Con A 组)
CpG ODN 预处理组(CpG ODN/Con A 组)
(二)CpG ODN 预处理对 ConA 诱导肝损伤的影响
CpG ODN(100μg/只小鼠)或 PBS 由尾静脉注射,3h 后尾静脉注射 Con A(15μg/g
体重),12h 后采集血清和肝脏组织,进行血清转氨酶和肝脏组织学检测。
1. 血清转氨酶检测:PBS 预处理组,Con A 静脉注射导致 ALT 与 AST 水平急剧
升高。 CpG ODN 预处理可使 Con A 注射后 ALT 与 AST 水平显著降低。CpG ODN
单独作用未引起转氨酶升高。
2. 组织学检测:PBS 预处理组肝脏大面积坏死,CpG ODN 预处理组肝组织未见
明显炎性病灶和坏死区域。
(三)CpG ODN 对 Con A 诱导肝脏损伤的保护作用具有时间和剂量依赖性
1. Con A 注射前后不同时间点经尾静脉注射 CpG ODN(100μg/小鼠);
2. Con A 注射前 3h,尾静脉注射不同剂量 CpG ODN;
Con A 注射后 12h 采集血清。
:
(1)CpG ODN 预处理 12h 和 3h 对 Con A 所致肝损伤均具有保护作用;Con A
注射后 2h 给予同等剂量 CpG ODN,未见有保护作用。
(2)静脉注射 CpG ODN 50μg/小鼠和 100μg/小鼠均可对 Con A 所致肝损伤产生
保护作用。
(四)CpG ODN预处理对小鼠存活时间的影响
静脉注射 CpG ODN 100μg/小鼠,3h 后尾静脉注射致死剂量 Con A(25μg/g 体重),
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观察小鼠存活时间。