文档介绍：大连医科大学
博士学位论文
p53促凋亡刺激蛋白在非小细胞肺癌中表达的研究
姓名:李士军
申请学位级别:博士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:施广霞
20090601
俚蛲龃碳さ鞍自诜切∠赴肺癌中表达的研究博士研究生:病理学和病理生理学李士军指导教师:施广霞教授专业名称:摘要目的与背景肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,发病率增长迅速,近%以上的肺癌为非小细胞肺癌.,,尽管手术切除是早期钣行У闹瘟品椒ǎサ幕颊叩揭皆壕驼锸保丫属于晚期,失去了外科手术和多学科根治的最佳时机,手术病人的术后复发率高,因此化疗成为治疗肺癌的主要手段。由于赴哂谢为~%。研究表明:细胞凋亡的阻断是肺癌化疗抵抗的一种重要机制。许多化疗药物通过损伤盏枷赴蛲銎鹱饔茫琢鲆职┗羌V匾5牡鹘诜肿樱琾基因缺失或突变导致的榈嫉南赴凋亡功能缺陷是非小细胞肺癌等对损伤幕埔┪锏挚沟闹匾;制。赴蛲龉δ艿拇碳さ鞍,畇功能,因而对表达和不表达闹琢鱿赴牡蛲鲇械鹘谧饔谩R吧且桓鲋琢鲆种频鞍祝灾琢龅姆⑸⒎⒄故峭ü盏枷赴⑸蛲或阻滞细胞周期。但为什么在未发生槐涫比匀环⑸裥灾琢觯琾不能抑制肿瘤细胞的生长芯糠⑾,野生型墓δ苌ナЭ赡苡階表达改变有关。目前,对于家族与肿瘤的关系,尤其是家族与非小细胞肺癌的认知多来源于体外实验,对非小细胞肺癌患者癌组织以及非小细胞肺癌患者化疗时表达的变化研究,国内尚未见报道。因此,本研究探讨了糯ū尘安煌姆切∠赴伟┫赴曛衟促凋亡刺激蛋自疗抵抗性或在化疗过程中产生抵抗,脑ず蠛懿睿荒甏婊盥式是榈嫉南赴蛲龉δ艿牡鹘诘鞍祝珹唤瞿芄惶匾煨约活南赴蛲龉δ埽材芗せ頿同组蛋白蚿的细胞凋亡鏐、,通过提高原凋亡基因的活力促进览档南赴
家族的表达和化疗药物作用非小细胞肺癌细胞株后表达的调节,以及非小细胞肺癌癌组织、癌旁组织,正常肺组织中煌刺表达的变化,非小细胞肺癌患者化疗过程中监测外周血表达的临床意义。通过本研究探讨的表达与非小细胞肺癌发生的相关性,以及化疗药物对表达的影响,为非小细胞肺癌的诊断和治疗寻材料和方法细胞标本选取肺鳞癌细胞株瓾,槐湫停环蜗侔┫赴组织标本选自年轮羖卤驹旱姆切∠赴伟┦质跚谐组织、癌旁组织┳、肺组织┳橹咴低各例。其中男性患者例,;诊断为肺腺癌细胞癌头蜗侔┝郯┓只例。血液标本来自上述颊撸占魄昂蟮难R罕瓯荆渲凶±6哉兆槲=】堤寮煺撸行年龄辏炅浞植辍瓵标准品选取通过转录得到的高浓度质粒,,提取B蓟竦玫腸菀阎P蛄猩杓特异性引物,建立检测蛲龃碳さ鞍譇的实时荧光定量方法;τ檬凳庇ü舛縍椒ḿ觳夥伟┳橹┡宰橹⒄肺组织表达,免疫组化检测肺癌组织泶镒刺≡駊遗传背景不同的非小细胞肺癌细胞株瓾槐型虯野生型信嘌没埔┪锼巢恚采用ㄉ秆』埔┪锩舾邢赴辏猛干涞缇导觳镹细胞株的形态学改变。应用实时荧光定量觳夥切∠赴伟┫赴闍的表达,比较不同细胞株之间和药物处理后表达的差异;觳夥切∠赴伟┗颊咄庵苎狝谋泶铮⒂攵哉兆楸冉希以及监测非小细胞肺癌患者化疗前后表达的变化。菇╥的婧吮泶镌靥澹弥侍宸ń玦干扰质粒转染入晗赴校ü齊癢实验检测细胞株和蛋白质表达。统计软件,计量资料采用縮表示,两组表找新的分子靶点。.吧汀郯┪猯渌切∠赴踪调查骄虯表达中实验数据采用
达率比较采用煅椋阶榫冉喜捎胒检验。票傅腁,曜计肪馗词笛椋贸瞿康幕駻谋曜记撸梢猿氏至己玫南咝怨叵岛椭馗葱裕甭示捣直,相关系数可达到陨希曜记叩睦┰鲂史直、,结果显示标准曲线的扩增效率良好,具有良好的稳定性与重复性,并且融解曲线峰型单一,均得到较好的扩增曲线和标准曲庖咦榛觳饬伟┳橹驼7巫橹瓯緋蛋白表达,跣裕粜裕粜月%,其中腺癌为.,粜员泶镌谙侔┯肓郯┘湮尴灾圆钜:跣裕例阳性,阳性率%。肺癌组鞍妆泶锫旁组织、肺组织的表达均逐渐升高,有统计学意义,。、∠赴伟┳橥庵苎V蠥,┳槭鹾蠡魄癆,进行两个周期化疗后测定结果分别为..、..,基因表达量均明显升高结果为.、.为线。,┳橹的表达分别为:.×,明显低于癌旁组织和肺组织。肺癌组织中表达在跣宰橹忻飨缘陀趐阳性组,癌旁组织和正常肺组的表达两组无显著性差异。和细胞后,∈,,的表达分别为:..,..×,明显低于对照组:..值分别为.×、.士×均.,....珹
阶閕干扰质粒均可使两株细胞暗鞍妆泶锵降,%,对瓾和