文档介绍：广州医学院
硕士学位论文
结核分枝杆菌喹诺酮类耐药基因的研究
姓名:尹小毛
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:吴爱武;刘启才
20100501
中文摘要
结核分枝杆菌喹诺酮类耐药基因的研究
专业:免疫学
申请人:尹小毛
导师:吴爱武教授刘启才副教授
中文摘要
研究背景与目的
结核病是一种对人类影响严重的传染性疾病,2006 年全球有 180 万人死于
结核病,920 万人成为新发结核病患者。该病需要较长时间的药物联合治疗才能
治愈,但目前能用于该病治疗的药物有限,而且随着耐药结核病特别是耐多药结
核病的出现,结核病控制工作和公共健康安全正遭受越来越严峻的挑战。
作为广谱的抗生素,喹诺酮类药物逐渐被用于结核病的治疗,并有可能作为
一线药物使用。不幸的是,随着该类药物的广泛使用及不同程度的滥用和误用,
对该类药物耐受的结核分枝杆菌(MTB)开始出现并逐渐增多。现有的研究已
经证实 gyrA 基因和 gyrB 基因的突变是 MTB 喹诺酮类耐药的主要分子机制,但
各研究者所发现的突变位点及突变频率尚存在差异,因此需要进一步的研究来深
入分析 MTB 的喹诺酮类耐药机制。
本研究通过检测耐喹诺酮类结核分枝杆菌临床菌株 gyrA 基因和 gyrB 基因的
突变类型和突变频率,分析突变类型与耐药水平之间的关系,阐述 gyrA 基因和
gyrB 基因突变在结核分枝杆菌喹诺酮类耐药中作用。
方法
从肺结核患者的痰液中分离出 67 株 MTB 临床菌株,采用绝对浓度法测定
MTB 临床菌株对左氧氟沙星(LVX)的敏感性,并应用聚合酶链反应(PCR)
和 DNA 直接测序(DS)技术检测其 gyrA 基因和 gyrB 基因的突变情况。
1
广州医学院硕士学位论文
结果
1. 64 株 MTB 临床 LVX 耐药菌株有 47 株 gyrA 基因序列发生突变,突变率
为 %。其中 42 株低浓度耐药菌株有 27 株存在突变,突变率为 %;22 株
高浓度耐药菌株有 20 株发生突变,突变率为 %。47 株 gyrA 基因突变菌株
中,其中 45 株为单位点突变,另 2 株为双位点突变。单位点突变发生在 70 位、
89 位、90 位、91 位和 94 位,双位点突变发生在 90 位+94 位,94 位为突变频率
最高的位点,占总例数的 %。具体的突变类型包括 H70R、D89N、A90V、
S91A、D94G、D94A、D94N 等 7 种单位点突变和 1 种 A90V+D94A 双位点突变。
其中,H70R、D89N 单位点突变和 A90V+D94A 双位点突变均只导致高浓度耐药,
而其它突变类型即可致低浓度耐药也可引起高浓度耐药。
2. 64 株 LVX 耐药 MTB 临床菌株中,仅有 1 株发生 gyrB 基因突变,为
Thr511Asn 突变。
结论
gryA 基因和 gyrB 基因的突变是 MTB 喹诺酮类耐药的主要分子机制,其不
同的突变类型可导致不同程度的耐药水平改变。但是,gryA 基因和 gyrB 基因的
突变并不能解释所有 MTB 喹诺酮类耐药现象。因此,有必要对其它耐药机制(如
药物外排泵)进行研究。
关键词:gyrA 基因 gyrB 基因结核分枝杆菌喹诺酮
2
英文摘要
Study on Quinolone Resistance Gene of
Mycobacterium tuberculosis
Speciality: immunology
Candidate: Xiaomao Yin
Supervisor: Prof. Aiwu Wu Associate Prof. Qicai Liu
Abstract
Background and Objective
Tuberculosis is a serious infectious disease causing million new cases and
million deaths worldwide in 2006. This disease is difficult to treat and requires
regimens containing several drugs administered over a prolonged period. Relatively
few drugs are effective against Mycobacter