文档介绍：徐州医学院
硕士学位论文
survivin反义寡核苷酸诱导SGC7901细胞凋亡及增强紫杉醇敏感
性的实验研究
姓名:何金兰
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:孔庆兖
20090501
徐州医学院硕士学位论文
论文独创性声明
本论文是我个
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作者签名: 日期: 200 年月
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作者签名: 导师签名: 日期: 200 年月
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survivin 反义寡核苷酸诱导 SGC7901 细胞凋亡及增强紫杉
醇敏感性的实验研究
中文摘要
Survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的一员,是迄今发现最强的凋亡抑制因
子之一。对细胞凋亡和分裂周期有双重调控作用:survivin直接作用于caspase,
主要抑制凋亡终末效应蛋白caspase-3和caspase-7或干扰caspase-9的活性,阻断由
各种刺激诱导的细胞凋亡的共同通路;survivin特异性表达于G2/M期,通过与有
丝分裂纺锤体的微管结合,参与对细胞基因的转录调控。由于其具有选择性表
达于胚胎和肿瘤组织而在绝大多数正常终末分化组织不表达的特点,可能成为
肿瘤诊断的标志物以及肿瘤基因治疗的新靶点。本实验设计高特异性survivin反
义寡核苷酸序列,并全程硫代修饰,经脂质体包裹,转染SGC7901胃癌细胞,
研究survivin反义寡核苷酸诱导细胞凋亡及增殖抑制作用,以及反义寡核苷酸能
否增强胃癌细胞对紫杉醇作用的敏感性,为胃癌的基因治疗提供一个新的的靶
点及相关理论依据。
目的研究转染生存素(survivin)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide , Asodn)
抗肿瘤作用以及是否增强紫杉醇敏感性;并探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的作用机
制。
方法人工合成反义寡核苷酸(Asodn),经脂质体包裹,将反义寡核苷酸转染
SGC7901胃癌细胞,荧光显微镜观察细胞形态变化及转染情况,MTT观察反义
寡核苷酸对SGC7901胃癌细胞增殖抑制作用,Westernblot及RT-PCR分别检测
survivin蛋白、caspase-3蛋白及survivin mRNA表达,荧光分光光度计检测
caspase-3 活性变化,Hoechst染色观察细胞凋亡形态改变及流式细胞仪检测细胞
凋亡率。
结果①荧光显微镜及流式细胞仪观察反义寡核苷酸成功转染入SGC7901细
胞,荧光显微镜下观察反义寡核苷酸(Asodn)组细胞变圆、折光增强、漂浮、细
胞碎片形成等变化,而Control组、Lip组和Sodn组细胞贴壁生长良好,呈梭形;
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Hoechst染色观察Control组、Lip组和Sodn组细胞核呈正常的蓝色,而Asodn组细
胞核染色增强,核质浓缩,核碎裂,呈明显凋亡形态改变。②用与同浓度、同
时间点的Control组、Lip组及Sodn组相比,Asodn组细胞增殖抑制率明显增高
(P<)。100~500 nmol/L Asodn 作用24 h、48 h和72 h。后均不同程度的抑制
胃癌细胞的增殖,500 nmol/LAsodn作用24 h、48 h、72 h细胞增殖抑制率分别为
(±)%、(±) %和(±)%,作用时间越长,抑制率越高,抑制
率与时间呈正相关(r48 h=, P=; r72 h=, P=);随转染浓度增高,
抑制率也增高,抑制率与Asodn 浓度呈剂量依赖关系(r500= P=;
r400=, P=; r300= P=; r200= P=)。100 nmol/L转染48h
时抑制率仅(±)%,500 nmol/L时高达(±)%。③与Control组、Lip
组、Sodn组比较,Asodn组survivin蛋白及sur