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指导教师签名:副::垦朴掌冢亚厶:￡。论文作者签名:犊中国医科大学研究生学位论文独创性声明,』一一中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,,本人承担一切相关责任。本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,以采用影印、缩印或其他手段保存论文。
嘶在肾癌组织中的表达及反义疫组化,辴锄,—土魇较赴堑仁侄危鄄煊蚷、匆骞寡核苷酸诱导肾癌细胞凋亡及机制的研究前言肿瘤是一类细胞增殖周期紊乱性疾病,细胞增殖和凋亡的失衡可以导致肿瘤的发生和发展,对细胞周期的调控在肿瘤的发生和治疗中起重要作用。不可控制的细胞增殖是癌症的特征。恶性肿瘤的增殖从生物学角度看主要表现在两个方面:一方面是肿瘤细胞的“不灭性”,即凋亡障碍;另一方面是细胞分裂的失控,即细胞周期网络调控系统的障碍。Ⅳ是近来分离的哺乳动物凋亡抑制剂,具有与其他凋亡基因不一样的特性,即在良好分化的正常组织中不表达,但是广泛表达于各种肿瘤组织。它在肿瘤中高表达反映了凋亡抑制在肿瘤进展中的作用,而它在有丝分裂中的作用引起了人们对于细胞增殖和细胞凋亡的兴趣。目的通过免疫组化和—椒ḿ觳饬薙,ⅲ琲谏霭┳橹蜕霭┫胞系中的表达情况,通过反义寡核苷酸技术,观察了其对肾癌细胞凋亡的影响,探讨其对肿瘤细胞影响的途径。方法:τ妹庖咦榛椒ḿ觳霭┗颊吆I鲎橹的表达情况,应用—蛍检测霭┳橹例正常肾组织及两种肾癌细胞系籓和中谋达情况。ü侍褰榈嫉膕匆骞押塑账峒际酰捎玫缇担核苛酸对肾癌细胞凋亡、增殖的影响。
果结霭┳橹胁煌潭鹊腟鬷泶铮饕1泶镉谙赴胞浆和细胞膜,为浅黄色和棕黄色。例正常肾组织很少见到白的表达。肾癌组织和正常肾组织吸光度分别为±和±.两者比较,±砝嘈屯该飨胞癌,嗜色细胞癌和嫌色细胞癌吸光度值分别为±,±±矸旨渡霭┳织珿琿和吸光度值分别为±,±,±。不同肾癌临床分期蚝廷蟆ⅱ粑舛戎捣直鹞....和±,各期间比较,差异无显著性意义。觳饨峁允荆I鲎橹泶镆跣裕霭┳橹土街稚霭┫赴一虯胁煌潭鹊腟鞍缀蚼泶铮臣蒲П砻鞑异有显著性意义。H竞笊霭┫赴⒔峁沟谋浠鹤H窘崾罂见细胞皱缩,细胞膜微绒毛消失,染色质浓缩,致密的凋亡小体亦较多。免疫细胞化学染色显示鞍籽粜钥帕6ㄎ挥谙赴剩实浦磷鼗粕染色;空白对照组和组染色较强,而槊飨约跞酢8髯橄赴均有不同程度的特异性基因条带表达,空白对照组和正义对照组表达最强,而楸泶锵喽越先酢狿结果与空白对照组和正义对照组相比,楸泶锩飨韵碌。结果也显示,与空白对照组和蛋白表达水平相比较,楸泶亦明显下调,,狈酵伎杉H竞蠖短宸期细胞跎伲珿遄蟛喑现明显的凋亡峰嵌短宸,/诔拭飨栽黾忧魇啤8髯橄赴蛲分别为.%,%,.±ィ繭.%,.±ィ槭笛樽橄赴蛲鼍隙哉兆橛邢灾黾印对细胞凋亡的影响呈浓度依赖关系。经ḿ觳猓/饔,后,肾癌细胞抑制率分别为..ィ±%和.%,呈现时间依赖关系,—·
检测发现,正常肾组织不表达,而肾癌组织不同程度表达油论结狙芯坑τ妹庖咦榛姆椒ㄔ霭┳橹I鲎橹蛋白,表明蜕霭┑姆⑸泄亍狙芯勘砻鳎煌±砝嘈停煌俅卜制诩洌琒谋泶锊钜无显著性意义,琲谋泶锼孀欧只潭鹊慕档投龈撸得鱏、表达和肾癌的分化程度有关,和肾癌的发展有关,可以用来作为判断肿瘤预后的标志物。臼笛槔梅匆寮际酰铣刹⒆H景邢騍姆匆骞押塑账幔结果表明转染成功后,肾癌细胞系中Ⅳ和蛋白的表达呈现下降趋势。提示可以通过竭筰揪吨瘟粕霭臼笛楸砻鱏姆匆骞押塑账岫陨霭┫赴囊种菩вΤ氏剂量一时间依赖效应,进一步证实了琲姆匆骞押塑账嶂瘟粕霭┑有效性。姆匆骞押塑账嵬ü獗誗山谋泶铮盏忌霭┫赴的生长停滞于/冢怪薹ㄍ瓿捎兴糠至眩佣种粕霭┫赴脑鲋活性。,的反义寡核苷酸通过封闭虻谋泶锏贾趐的激活,从而促进肾