文档介绍：内蒙古医学院
硕士学位论文
压力对离体表皮干细胞生物学特性影响的实验研究
姓名:王钢
申请学位级别:硕士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:刘文忠;李建福
20100501
中摘文要白⒔堑鞍、面整合素、的表达特征。结果、难褂α目的观察体外培养的谘沽ψ饔孟碌谋硇捅浠朐鲋城榭觯A俅财し衾┱器的应用提供理论依据。方法对体外培养的大鼠表皮干细胞进行间歇加压、刻次,每次,共培养,采用免疫组化染色、免疫荧光双染、细胞克隆形成率等技术与方法检测所培养细胞整合素、角蛋白⒔堑鞍、角蛋作用芎螅逋馀嘌谋砥じ上赴赴寺⌒纬陕史直鹞ァィ飨愿哂组与对照组,、榭杉鸎阳性细胞表达。结论表皮干细胞具有压应力敏感性,适当的压应力可诱导表皮干细胞增殖与分化。关键词压应力表皮干细胞增殖分化。
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压力对离体表皮干细胞生物学特性影晌的实验研究兔抗大鼠拍整合素多克隆抗体近来有研究证实适当的机械应力可促进细胞增殖与分化。皮肤软组织扩张术琒就是借助张力刺激获得”额外”皮肤的一种临床技术。将机械应力作用于机体细胞研究其受外力作用后的各种变化,是目前细胞生物学领域发展十分迅速的一种方法。表皮干细胞,作为皮肤组织的特异性干细胞,是皮肤组织以及其附属器发生、新陈代谢的源细胞,其与皮肤组织的修复、重建密切相关。为此本课题以体外培养的Q芯慷韵螅鄄熘芷谛匝沽Χ云渖镅匦缘挠响,为进一步研究牧ρвΦ於ɑ ,美国小鼠抗大鼠角蛋白抗体,拦小鼠抗大鼠的角蛋白单克隆抗体,—羊抗大鼠的角蛋白单克隆抗体,一小鼠抗大鼠角蛋白,拦羊抗大鼠的多克隆抗体荧光素标记的抗体试剂盒,免疫组化试剂盒无钙培养基、硫酸庆大霉素C拦鶥胎牛血清,美国胰蛋白酶、拦鶪公司鼠Ⅳ型胶原包被培养瓶表皮细胞生长因子,
虚鏊查匿堂陵亟±班塞生堂僮迨塞倒置相差荧光显微镜流式细胞仪离心机公司电子天平岛津公司自动更换培养液的压力控制细胞培养装置沂涤眯滦妥ɡ琋篫逋夥掷搿⑴〕錾挠资蟊巢咳ú皮肤,去除皮下组织,经逑次,常规细胞培养用双抗唷⒘疵顾液浸泡后,修剪成×笮∽橹椤0凑兆橹榕嘌袢∠赴椒ǎ接谖蘧赴养瓶底,加入由无钙培养基%/硫酸庆大霉素组成的培养液,置。%⒈ズ褪6鹊南赴嘌淠诜跤后,仅收集培养液,./,加入痬齑竺顾兀靡娑炒娲谩S们坝胍衙鹁.%液溶解:〕錾挠资笃し羧ú悖去除皮下组织,修剪成羖大小组织块,ヒ鹊鞍酌℃消化过夜,次日分离真、表皮,将表皮组织再次以ヒ让合抡竦聪瞥傻ハ赴海加入与胰酶等量的含%呐嘌罩瓜/胄模锨寮耙严的表皮,加入嘌赴剖螅认赴浦僚嘌磕谥、骸⒈ズ湿度的细胞培养箱内培养,隔日换液,倒置相差显微镜下监视细胞生长情况。姆掷搿⑴嘌氪炕鲜雠嘌慕侵市纬上赴て搪嘌康祝入赴海温度下,振荡消化—,观察到大部分细胞悬浮时,加入与赴旱攘康暮的培养基终止消化,吹次,痬离心,弃上清,加入嘌浦潦螈粜徒涸坏呐嘌磕冢下静置—怪孟嗖钕晕⒕迪鹿鄄煊猩⒃诘南赴烟冢闳ヅ嘌磕诘呐嘌尤胧柿新鲜嘌、、饱和湿度的细胞培养箱内培养,隔日换液。.
胞化学染色;嬉籭疌上述四组培养细胞分别于加压后欤⊙辛魇较赴羌觳狻7椒ㄈ缦拢内蒙古医学院硕士研究生学鱼论文次换液,更换鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶,ù.中的增殖情况良好且已经铺满培养瓶底的细胞进行传代培养。去除培养瓶中培养液,⌒某逑次后,加入赴海怪孟嗖钕微镜下观察至贴壁细胞基本全部悬浮时,加入与攘康迅速终止消化,吹次,痬离心,弃上清,嘌匦赴⒁×痬募数,置于Ⅳ型胶原包被的培养瓶。;畃纤兀疜免疫细庖哂ü馑痉ǘ运嘌赴蠩鉴定逋饧友故笛以每孔约/细胞密度,将培养的又值着嘌逯校直鹨、大小的压应力间断作用于细胞,每日危看<设对照组,即细胞置入加压装置中,不加压。友购蟮目寺⌒纬陕以每孔鱿赴拿芏冉獷接种于孔培养板中,如上所述及的、压应力作用于细胞后,サ亩嗑奂兹┕潭,サ穆薜っ鰾,旧ǎ饩迪录剖纬傻牟簧儆鱿赴目寺〖┕潭ㄊ苎瓜赴种樱肧—进行染色,余实验操作严格按试剂盒说明书进行,同时以嬉豢棺魑?瞻锥哉铡的工作浓度微镜下进行观察、摄像。.庖哂ü馊旧受压细胞进行/ū昙敲庖哂ü馊旧āJ笛椴僮餮细癜词约梁兴得魇榻小异硫氰酸荧光素躺ü标记的抗体检测、5每巳购煊ü馑红色荧光昙堑目固寮觳釵U纤亍2患右豢股枰跣远哉铡9簿劢辜す馍柘晕⒕迪观察、<尤说攘康暮呐嘌罩瓜浞执荡蚴瓜赴ú客驯凇5退痬,离心,弃