文档介绍：江南大学
硕士学位论文
节杆菌(Arthrobacter sp.)产β-半乳糖苷酶的研究
姓名:孙慧慧
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:唐蕾
20090801
摘要一半乳糖苷酶是一种同时具有催化水解反应和转移活性的酶,它可将乳糖分解为半乳糖和葡萄糖,水解后的半乳糖在转移活性催化下,可和果糖生成乳果糖。由于乳糖酶的这两种功能,决定了其主要用途为:到馀D讨械娜樘牵饩鋈樘遣荒椭用酶法合成乳果糖。研究室此前筛选到了~株有上述酶活性的节杆菌了1疚拇右韵录父龇矫娑愿镁瓴缸隽顺醪窖芯浚在乳糖初始浓度为/即反应体系中浓度为%时,乳糖充分水解为葡萄糖和半乳糖,酶活为痬乳糖T诖嗣富钆ǘ认录尤肴樘呛凸鞘怪张ǘ确直鹞%和ァW\辗从Σ锞觳猓楣遣看∥掖慷冉细摺8萌樘敲在℃条件下,加酶量为痬乳糖保饔山D讨サ娜樘墙到狻在跫拢嗤募用噶孔饔鲂∈保D讨腥樘墙到饴饰ァ=,有一定的应用潜力。通过蛋白质非变性电泳技术,,其中同工酶,为组成型表达,不受乳糖诱导,且表达量高。而同工酶虸为诱导型表达,必须在乳糖诱导下产生。这一结果为肴樘擒彰傅姆掷氪炕突虻目隆表达奠定了基础。通过一轮紫外诱变,筛选到一株产酶能力提高%、转苷能力提高倍的诱变菌株,并通过正交实验优化了发酵培养基,贚糖浓度为∥衩捉浓度为疞,ǘ任./⒕。该菌株产酶最适温度和最适较出发菌株产酶变化不大,分别为℃、。但是有较好的温度稳定性和稳定性,金属离子对诱变前后产酶的影响保持一致,其中有明显的抑制作用,而和远叨加明显的激活作用。为了能进一步克隆肴樘擒彰富颍韭畚亩愿镁幕蜃镈提取方法进行了研究。由于节杆菌属革兰氏阳性菌,破壁相对困难,所以采用反复冷冻研磨、甲苯处理两种方法对细胞进行预处理,随后进行抽提,并与细菌基因组提取试剂盒进行比较。改良的法提取的D0褰蠵扩增,条带单一、特异性强。纯度达到要求,可作为┰龅哪0褰泻笮幕虿僮骱头肿由镅а芯俊关键词:肴樘擒彰福唤诟司蝗楣牵蛔贤庥毡洌籇的提取摘要
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芝碴型:篁笠型:整塾垄璺:凹独创性声明兰望:旦关于论文使用授权的说明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,。签本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规定:江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文,并且本人电子文档的内容争纸质论文的内容相一致。:导师签名::日
第一章引言研究背景乳糖——◆乳糖酶一乳糖敢蝗樘恰!!舭肴樘腔幻葡萄糖肴樘腔幻受体——◆半乳糖基一受体肴樘擒彰讣捌浯呋姆从蚣虺话肴樘擒彰甮H樘敲甘且恢治乳糖酶,.,,呈白色粉末状,无味道,无臭,溶解后是一种浅棕色液体【。已由美国食品与药品管理局蚃称诽砑蛹亮:献ḿ椅被评审机构确认为安全物质,中国卫生部已于年月将其列入食品添加剂使用卫生标准中【。⑸狭选R话闼道锤妹赣两种催化性质:一是催化水解反应,当半乳糖苷的受体是水时,发生的是水解反应,可以将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖,还可以将邻硝基苯酚..拎ò肴樘擒辗纸馕A谙基苯酚和半乳糖;二是催化转移反应,当水解后的半乳糖受体是糖或醇时,发生的是转糖苷反应。如果受体是果糖,可生成乳果糖,如果受体是半乳糖,则可生成低聚半乳糖。关于乳糖酶的水解作用机制,等人的研究表明:利用乳糖酶水解乳糖包括三个步骤,最后一步变现水解或转移活性。步骤如下:和根据多年的研究推测了乳糖的水解机制,如图所示【。/·甌●
乳果糖是人工合成的含酮双糖,又叫乳酮糖、异构乳糖,是指半乳糖和果糖以,糖苷键结合,】。乳果糖易溶于水,甜度是蔗糖①防病治病的作用产生。而双歧杆菌能通过磷壁酸与肠粘膜上皮细胞的紧密结合,占据肠粘膜表面,形成性物质,能促使结肠内渗透压增高,水分吸收减少,粪便体积增大而成软便,促进肠蠕动,清除肠道内容物,排除有毒有害物质,治疗各种原因导致的便秘,防治消化系统疾肾功能衰竭。双歧