文档介绍：沈阳药科大学
硕士学位论文
硫酸软骨素裂解酶产生菌的筛选、鉴定及其酶固定化方法的研
究
姓名:牛海滨
申请学位级别:硕士
专业:微生物与生化药学
指导教师:阎浩林
20090501
摘要脂,交联剂戊二醛浓度ィ涣J奔涣N露;利用此条件获得的固定化酶的酶定性。判訮⑶蚬潭ɑ疌挠呕跫牵憾员蕉.,甲醛,盐酸V票凝胶;凝胶复判訮⑶颍还潭ㄎ露⒐潭ㄊ奔⒓用噶痝磁性表观米氏常数一疞,具有良好的操作稳定性。关键词:硫酸软骨素裂解酶;温和气单胞菌;固定化;明胶;海藻酸钠;大孔树脂;磁硫酸软骨素裂解酶騝珻具有多种药用价值,尤其在制备低分子量硫酸软骨素方面有着广阔的应用前景。本论文对产生菌的筛选、菌株的鉴定及其产酶特性、酶学性质与酶的固定化方法做了系统的研究。利用快速平板筛选法从鲤鱼鱼肠标本中筛选出一株产活性较高的菌株,通过形态学观察和生理生化试验,以及对该菌株基因序列的分析,将菌株归属为温和气单胞菌;对的表达方式和菌株产酶特性的研究表明,为胞外酶,菌株在℃发酵辈鶦钚源锏阶罡撸徊捎昧蛩犸С恋矸ㄖ票噶舜置敢海⒖察了的酶学性质。利用制备的粗酶液为原料,分别使用明胶和海藻酸钠、大孔树脂、磁性微球为载体,进行固定化方法的研究。结果表明:鹘汉秃T逅崮菩窆潭ɑ疌挠化条件是:明胶浓度%,海藻酸钠浓度ィ然婆ǘ%,加酶量/体系,交联剂戊二醛浓度ィ.%,交联时间豪么颂跫竦玫墓潭ɑ傅拿秆灾饰#鹤钍饰度,最适,表观米氏常数之疞,具有一定的操作稳定性。罂资髦附固定化的优化条件是:吸附温度℃,:最适温度℃.℃,最适,表观米氏常数~疞,具有较好的操作稳微球制备固定化酶;利用此条件制备的固定化酶的酶学性质为:最适温度℃,最适性微球沈阳药科大学硕士学位论文,
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学位论文作者签名:车玛瑶签字日期:蛔月形日关于学位论文独立完成和。内容创新的声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得任何教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。
新虢岸⒈C芸冢贠年/口五/一一年解密后适用本授权书。作者签名:车辱磋目期:叫年拢疞日期:卅年抡枞学位论文版权使用授权书系生金科堂皇生物剑药学院邀生物皇生丝荭堂专业生连送髡咝彰在论文《硫酸软骨素裂解酶产生菌的筛选、鉴定及其酶固定化方法研究》沈阳药科大学攻读博士口/硕士囹学位而完成的作品。本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权沈阳药科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于⒉槐C苋铡朐谝陨舷嘤Ψ娇蚰诖颉啊獭
器弘ぁ逛_Α第一章前言硫酸软骨素简介的软骨、喉骨、鼻骨和气管中,骨腱、韧带、皮肤、椎间盘等组织中也有;同时,也是哺乳连接而形成生物大分子.,,相对分子量.。药理学研究表明,具有抗关节炎、增强免疫力嗍、抗凝血、保护和修复神经元、抗肿硫酸软骨素琧是一种酸性黏多糖,在自然界中,主要存在于动物动物血液、动脉血管组织内的主要成分。为白色或微黄色粉末,无臭,无味,吸水性强,易溶于水而成黏度大的溶液,不溶于乙醇、丙酮和乙醚等有机溶剂。其分子中含多个硫酸基与羧基,故其溶液呈酸性【。是糖胺聚糖珿中的典型代表物质,主要由咸烟侨┧和灰阴#,ú煌肿恿扛饕臁麓曩砉巧不饱翔二糖由于硫酸基团在葡萄糖醛酸和半乳糖上的位置和多少的不同而分为硫酸基在氨基半乳糖的第籆上蛩峄诎被肴樘堑牡位等,其主要分类‘如表所示。图硫酸软骨素及不饱和二糖的结构图表及不同来源的二糖单位沈阳药科大学硕士学位论文·一一一Α。蛀”
酸基团往往被破坏而丧失药效,因此需进一步酯化及脱盐,生产工艺相对复杂;相反,、软骨素、透明质酸等糖胺聚糖降解为不饱和二糖肮烟堑牧呀饷竅。该酶主其自身酶产量很低,每升不足个单位,而且只有少数发达国家拥有的生产技术,人们对微生物产生的的研究最早可追溯到上个世纪初期。在年,与ǖ懒宋⑸锟山到饬蛩崛砉撬兀黄浜驨与仓な盗四承┚某樘瘤以及调脂、降脂和抗动脉粥样硬化【康榷嘀稚镅ё饔谩魑1=∈称坊