文档介绍：华中科技大学
硕士学位论文
MCMV感染对神经干细胞Wnt信号通路下游分化相关靶基因蛋白表
达的影响
姓名:田佳
申请学位级别:硕士
专业:儿科学
指导教师:方峰
20090501
华中科技大学硕士学位论文
MCMV 感染对神经干细胞 Wnt 信号通路下游分化相关靶基因
蛋白表达的影响

研究生田佳
导师方峰教授

中文摘要
【目的】
研究 MCMV 对神经干细胞 Wnt 信号通路下游分化相关靶基因 c-myc、cyclinD1、
ngn-1、ngn-2 蛋白表达的影响,以探讨 CMV 致胎脑发育异常的分子机制。
【方法】
1) 小鼠神经干细胞的分离培养:剖宫取出孕的 BALB/c 胎鼠脑组织,制备单细
胞悬液,过滤后用含 EGF、bFGF 和 B27 的 DMEM/F12 培养基培养;取第 4~5
代细胞,用添加 2%胎牛血清的 DMEM/F12 分化培养基(不含 EGF、bFGF 和 B27)
诱导 NSCs 分化,以模拟胎脑发育过程。
2) MCMV 感染 NSCs 分化培养细胞模型:用感染复数(MOI)分别为 5、1 和的
MCMV 毒株感染 NSCs,改用分化培养基进行分化培养,正常 NSCs 同期分化培养
作为对照。
3) MCMV 感染对 NSCs Wnt 信号途径分化相关基因蛋白表达的影响:采用 Western
Blot 法检测分化培养后、1d、2d、3d、4d 和 5d 时 NSCs Wnt 信号途径下游分
化相关靶基因 c-myc、cyclinD1、ngn-1、ngn-2 蛋白表达水平的动态变化,各实验
重复 3 次。
【结果】
1) 体外成功分离培养NSCs,NSCs在体外可连续传代,呈球形生长,并可进一步分化。
2) MCMV感染NSCs后,镜下可观察到细胞贴壁障碍,细胞肿胀甚至崩解坏死。
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3) Western Blot检测结果:
a. 感染组c-myc蛋白表达量比正常对照组明显下降,除MOI=
外,其余各感染量与各时间点c-myc蛋白表达均显著低于正常对照组相应时间点表
达量(P﹤);
,各MOI感染组表达水平均明
显低于正常对照组(P﹤);在感染后2d和3d,MOI=5组明显高于其他三组(P
﹤),MOI=1组明显高于正常对照组(P﹤);在感染后4d和5d,MOI=5组
明显低于其他三组(P﹤);
c. 感染组ngn-1蛋白表达量比正常对照组明显下降,当MOI=,ngn-1蛋白表达量
在感染后1d、2d明显低于正常对照组(P<), 而MOI=1组和MOI=5组表达量
在感染后1d、2d、3d、4d、5d均明显低于正常对照组(P<);
-2蛋白表达先降后升,与正常组先升后降相反,MOI=
至感染后5d,且明显低于正常对照组峰值(P<)。各感染组ngn-2表达量在感
染后1d明显低于正常对照组(P<);感染后2d,MOI=5组明显低于正常对照
组(P<);在感染后3d、4d、5d,各组ngn-2表达量又明显高于正常对照组(P
<)。
【结论】
1) MCMV抑制分化培养的NSCs细胞c-myc和ngn-1蛋白表达,并诱导cyclinD1和ngn-2
蛋白表达紊乱,其效应随感染滴度增加而更为显著;
2) MCMV抑制和干扰NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因表达可能是其抑制
NSCs增殖分化进而导致胎脑损伤的重要作用机制之一。

关键词巨细胞病毒;神经干细胞;Wnt 信号途径;c-myc;cyclin D1;ngn-1;ngn-2

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华中科技大学硕士学位论文
The influence of MCMV infection on the protein expression of
downstream-differentiation-related target genes of Wnt signaling
pathway in neural stem cells

Abstract

Objectives: To investigate the influence of murine cytomegalovirus(MCMV) infection on