实训十六 间接血凝试验.doc

文档介绍：实训十六间接血凝试验
目的要求初步学会间接血凝的操作及结果判定。
仪器及材料 96孔110°~120°V型医用血凝板、10~100μl可调微量移液器、加样头、微型振荡器、猪瘟间接血凝抗原(猪瘟正向血凝诊断液)、猪瘟标准阳性血清和阴性血清、被检血清(56℃水浴灭活30min)、2%兔血清PBS液(、,灭能兔血清2ml,于4℃冰箱保存即成2%NRS液)。
方法与步骤(以猪瘟的间接血凝为例)
。
实表8 猪瘟间接血凝操作术式
V型板孔号
1
2
3
4
5
6
7
8
血清稀释倍数
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
1:64
1:128
对照
2%NRS (μl )
待检血清(μl )
抗原(μl )
50 50 50 50 50 50 50 50
50 50 50 50 50 50 50 弃去50
25 25 25 25 25 25 25 25
振荡1min 室温下(15℃以上)~2h。
%NRS60μl,取阴性血清20μl加入后混匀,取出30μl弃去,然后加入抗原25μl,此孔即为阴性血清对照孔。
在血凝板的第12排第1孔加2%NRS70μl,第2至第7孔各加2%NRS50μl,取阳性血清10μl,加第1孔混匀,并从中取出50μl加入第2孔混匀后取出50μl加入第3孔……直到第7孔混匀后弃去50μl,该孔的阳性血清稀释度为1:512,然后每孔各加抗原25μl,此即为阳性血清对照。
%NRS对照孔,红细胞应全部沉入孔底,无凝集现象(—)或呈(+)的轻度凝集为合格;阳性血清对照应呈(+++)凝集为合格。
在以上3孔对照合格的前提下,观察待检血清各孔的凝集程度,以呈“++”凝集的被检血清最大稀释度为其血凝效价(血凝价)。血清的血凝价达到1:16为免疫合格。
“++++”表示100%红细胞凝集
“+++”表示75%红细胞凝集
“++”表示50%红细胞凝集
“+”表示25%红细胞凝集
“-”表示红细胞100%沉于孔底,完全不凝集。