文档介绍：第二章抗生素产生菌的选育
进行抗生素产生菌选育的原因:
1 细菌耐药性逐年增加,致使一些抗生素的疗效降低,甚至无效;
2 条件病原菌的出现,尤其是在免疫力低下的宿主中,已经导致了治疗感染性疾病中的严重问题。(条件致病菌:有些细菌在正常情况下不致病,但在特定条件下可以治病,这类细菌称为条件致病菌或机会致病菌,比如居住部位的迁移;机体免疫功能低下;菌群失调)
发现微生物新药的新途径
各种筛选模型的建立,为发现微生物新药的多样性提供了可能.
扩大微生物资源,为获得微生物药物的多样性提供了可能微生物的多样性是提供微生物新药多样性的基础。
利用组合生物合成技术,创造获得多样性的“非天然”的天然化合物近年来组合生物合成是发现微生物新药的研究热点之一。
组合生物转化技术是发现微生物新药的有效途径
一、抗生素产生菌的筛选过程
二抗生素的产生菌的来源
1 放线菌
2 细菌
3 真菌
(一)样品的采集
土壤的营养:有机氮多----放线菌、细菌
有机氮少、酸性----真菌
土壤深度:
放线菌和细菌----0-1m( 80%在0-10cm )
真菌----0-
未开垦过的土壤最佳
南方地区土壤中的放线菌种类比北方多
采样季节一春秋天为宜
三、微生物的分离
(二)放线菌的分离
1 样品分离前的处理
除去或减少不需要微生物,增加所需要放线菌的数量。
(1)化学方法
SDS-酵母浸膏处理样品,可以使细菌数量明显减少,HV平板上55%~95%都是放线菌。
风干的土壤与CaCO3混合后培养,放线菌的数量可以增加100倍。风干的土壤减少了细菌的数量; CaCO3有利于放线菌的生长,抑制了大多数真菌的生长。
NaOH处理土壤,分离小单孢菌,1M NaOH处理土壤可以分离到诺卡氏菌和小单孢菌。
其他试剂:%酚、乙酸乙酯可以使细菌和真菌数量明显减少,有利于分离放线菌。
(2)物理方法
温度:根据各种微生物耐热程度的不同,用高温处理样品,可以分离到不同种类的放线菌。
离心:根据微生物大小对样品进行离心分离。如1600g离心20min,上清液中主要是放线菌孢子,沉淀中含有细菌和真菌孢子。
膜过滤:,过滤后把滤膜贴在平板培养基上培养。这种方法用来分离水中的小单孢菌和高温放线菌。
2 分离方法
(1)培养基
分离放线菌多采用合成培养基(精氨酸培养基、高氏一号培养基、察氏培养基)和有机培养基(t培养基)
(2)抗生素的加入
培养基中加入抗真菌抗生素和抗细菌抗生素,可以抑制真菌和细菌的生长,对放线菌进行浓缩。
(3)分离放线菌的方法
稀释法:无菌水稀释样品,然后涂布平板。
喷土法:用喷土机或其他方法把风干碾细的土样直接喷在分离平板上。
滤膜法:- μm的滤膜放在分离培养基的平板上,接种培养,放线菌菌丝可以穿过滤膜长到培养基中,而细菌在滤膜表面生长,去掉滤膜,培养基中的放线菌菌丝继续培养长出菌落。
(4)培养温度:一般25-30度,或者32-37度,培养7-14天;高温放线菌需要45-50度培养1-2天,海水中分离放线菌用20度培养6周左右。