文档介绍：新疆医科大学
博士学位论文
异常黑胆质成熟剂活性组分及其抑制HL-60细胞增殖作用的研究
姓名:木拉提·克扎衣别克
申请学位级别:博士
专业:药理学
指导教师:哈木拉提·吾甫尔
2009-06
中文摘要
异常黑胆质成熟剂活性组分及其抑制 HL-60
细胞增殖作用的研究

博士研究生:木拉提·克扎衣别克
导师:哈木拉提·吾甫尔教授

中文摘要

目的:
异常黑胆质成熟剂(国家发明专利№:)是维吾尔医复方制剂,
由破布木(Cordia dichotoma Forst.)、红枣( Ziziphus jujuba Mill.)、甘草(Glycyrrhiza
uralensis Fisch.)、牛舌草(Anchusa italica Retz.)、小茴香(Foeniculum vulgare Mill.)、
地锦草(Euphorbia humifusa Willd.)等药材组成,用于治疗由异常黑胆质所导致的
肿瘤、糖尿病和心血管疾病等。现代研究已证实,异常黑胆质成熟剂可清除自由基、
保护羟自由基引发的 DNA 氧化损伤和线粒体氧化损伤等,具有较强的抑制 HepG2
细胞体外生长、抑制 HepG2 细胞 DNA、RNA 和蛋白质生物合成等作用。
本文目的在于研究异常黑胆质成熟剂的化学组分并测定主要组分含量,以评价
异常黑胆质成熟剂的物质组成;进一步确定异常黑胆质成熟剂的体外抗癌有效部位;
以及评价复方中各单味药体外抗癌作用;研究适于工业化生产的异常黑胆质成熟剂
不同提取物的制备方法;建立异常黑胆质成熟剂有效部位色谱分析方法并评价异常
黑胆质成熟剂有效部位的主要化学成分。

方法:
,初步确定异常黑胆质成熟剂
所含化学成分的种类;以芦丁为对照品,采用 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 比色法测定
总黄酮含量;以没食子酸为对照品,采用 Folin-Ciocalteu 比色法测定总酚含量;以葡
萄糖为对照品,采用苯酚-硫酸法测定总糖含量;以甘草酸铵为对照品,采用香草醛-
高氯酸法测定总皂苷含量;采用重量法测定总生物碱含量。
Extr-1、Extr-2、Extr-3 和 Extr-4。
其中 Extr-1、Extr-2 和 Extr-3 三种提取物的制备采用大孔吸附树脂法,Extr-4 的制备
采用聚酰胺法;用 TLC 以及化学成分单项预试等方法对四种提取物所含成分进行初
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步研究;测定其主要化学组分的含量并对这四种提取物对 HL-60 细胞增殖的抑制作
用进行对比研究;测定 Extr-4 对 HL-60 细胞的 IC50 值;以 Silicagel 60 F254 为固定相,
分别以固蓝 B 盐试剂(FBS)和茴香醛/硫酸试剂(AS)为显色剂,对异常黑胆质成
熟剂的不同提取物进行 TLC 分析。
(Solid phase extraction,SPE)对 Extr-4 进行组分分离。具
体操作为:SPE 小柱以 MeOH 和水淋洗后备用。Extr-4 溶解于 40%MeOH 后装于 SPE
小柱内,将样品减压抽干,所得流出液减压浓缩并干燥,作为第一组分,即 SPE-p
(未被 SPE 柱吸附的成分)。SPE 小柱依次用 0%、20%、40%、60%和 80%MeOH
进行梯度洗脱,所得洗脱液分别减压蒸发至干,即得 SPE-0、SPE-20、SPE-40、SPE-60
和 SPE-80 等干燥备用的五个组分。
将 HL-60 细胞接种于培养板中,其细胞浓度为 ×106 个/ml,分为 7 组,培养
24h 后第一组加入供试品溶剂,作为空白对照组,其余 6 组分别加入 SPE-0、SPE-20、
SPE-40、SPE-60 和 SPE-80 待测溶液,样品在细胞培养基中最终浓度均为 50μg/ml,
将培养板置于 37℃、CO2 体积分数为 5%的恒温孵箱中培养,于 24h、48h 和 72h 用
台盼蓝染色法检测各组细胞存活率。为了确保实验结果的正确无误,重复进行两次
试验。
ASE 技术分别对组成异常黑胆质成熟剂的中各单味药进行提取。具体
操作为:将各单味药粉碎成粉末,置于底部提前加入滤膜且已知重量的萃取池中,
称重,关闭萃取池盖后将其固定在圆盘式传送装置上,依次以 CH2Cl2 和 MeOH 为提
取溶剂,设定 ASE 提取方法参数,启动加速溶剂提取仪进行提取,提取完成后仪器
自动停止