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三杆状病毒介导的腺相关病毒载体的生产1
雷求刚 1，徐增辉 2，钱其军 1,2 *
1 浙江理工大学生命科学学院，杭州(310018)
2 第二军医大学东方肝胆外科医院，上海(200438)
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摘要：由于腺相关病毒(Adeno-associated Viruses, AAV)的非致病性及能感染多种组织类
型，重组 AAV 载体（rAAV）在基因治疗领域备受关注。然而，如何有效生产 rAAV 以适
应临床上对其高产量的需求一直是个较大的瓶颈。借助杆状病毒携带 rAAV 包装所需组分，
通过感染昆虫细胞来生产 rAAV 是一种能够解决其产量瓶颈的生产方式。将 AAV2 的 Rep、
Cap 基因序列以及含 AAV2 ITR 及 EGFP 表达框的序列分别构建到三个杆状病毒中，通过共
感染 Sf9 细胞来生产 rAAV，结果显示成功包装出 rAAV 病毒，且病毒活力较好。这种生产
方式很容易放大，将为 AAV 载体产业化及临床应用奠定重要基础。
关键词：rAAV；杆状病毒；病毒生产

1. 引言
腺相关病毒（Adeno-associated Virus, AAV）是细小病毒(parvovirus)家族中依赖病毒属
（Dependovirus）中的一员，最早于 1965 年作为腺病毒制备物中的一种污染成分被发现[1]，
其复制性感染需要在腺病毒或单纯疱疹病毒的辅助下才能发生。AAV2 基因组为单链线性
DNA，大小为左右，包含 2 个开放阅读框(ORFs)，左边 Rep ORF 的四个产物 Rep78、
Rep68、Rep52 和 Rep40 主要负责病毒的位点特异性整合、复制和转录调控等；右边 Cap ORF
的三个产物 VP1, VP2 和 VP3 主要负责病毒颗粒的装配，构成 AAV 的外壳并将 AAV 单链
DNA 基因组包裹在壳内形成成熟的 AAV 病毒颗[2][3]。AAV 基因组的两端各有一个 145bp
的末端重复序列(ITR)，其中靠近末端的 125 个碱基是一个较长的回文结构，自身能通过碱
基互补配