文档介绍：四川农业大学
硕士学位论文
玻璃化冷冻保存小鼠GV期卵母细胞的研究
姓名:郭希萍
申请学位级别:硕士
专业:临床兽医学
指导教师:刘长松
20070501
摘要本实验对影响玻璃化冷冻保存小鼠期卵母细胞效果的几个因素进行了研究,如冻前预处理方法、卵母细胞形态、冷冻方法、解冻方法、基础液、胎牛血清浓度等,目的在于筛选适合超低温冷冻保存小鼠期卵母细胞的冷冻程序。研究结果如下:孕∈驡诼懵呀胁煌亩城霸ご恚肙法冷冻保存,解冻后继续培养成熟,进行体外受精,根据卵裂率分析不同平衡方法对小鼠卵母细胞的毒性作用。结果表明,用徊椒ù.、、、后的卵裂率分别为ァ.%、.%、ィ唤涯赶赴肊处理僖入,后,卵裂率分别为ァァァァ1砻鞫椒优于一步法。,培养成熟后体外受精,卵裂率分别是.%、.%,、ā法冷冻保存期卵母细胞,结果显示,与.%钜觳幌灾,杂庞贠法,两者与.%嬖诩灾钜。⒍椒ê腿椒ǘ設法冷冻保存的期卵母细胞进行解冻,.%肴椒ń舛.%∫海訥谛∈舐懵呀胁A化冷冻保存,结果表明,.%钜旒灾,与添加%胎牛血清效果差异显著..:小鼠:期卵母细胞;玻璃化冷冻
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肼符号说明Ⅳ中文生发泡生发泡破裂卵丘卵母细胞复合体裸卵人输卵管液杜氏磷酸盐缓冲液一种细胞培养液胎牛血清促卵泡素促黄体素孕马血清促性腺激素人绒毛膜促性腺激素开放式手拉细管毛细玻璃管含%聚蔗糖和崽:乙二醇:胎牛血清:缩略词英文全称%体外成熟乙二醇’:Ⅳ
加锄毒≯存薛专》毒锋月钐日月日论文独创性声明关于论文使用授权的声明矽辏月/本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得騮农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向矣关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名:导师签名
第一部分文献综述哺乳动物卵母细胞冷冻保存的研究进展溉槎锫涯赶赴涠潮4娴脑溉槎锫涯赶赴涠潮4娴睦卵母细胞的冷冻保存,是指将其保存于低温或超低温的条件下,使细胞处于新陈代谢和分裂速度的减慢或暂时停止状态,当温度恢复后,还能继续发育。卵母细胞的冷冻保存可在一定程度上促进体外受精琹⒑艘浦病转基因、性别鉴定、胚胎分割等技术的发展,为其提供更多的材料来源。卵母细胞的冷冻保存,还可以代替活体保种,建立动物基因库,降低保种成本,从而保护和拯救那些优良的品种资源和珍稀濒危野生动物,使其免受战争、自然灾害、疫病以及人为因素等的影响。基因库的建立还对组织胚胎学、发育生物学、遗传育种学以及胚胎生物技术的基础理论研究有重要价值。同时,冷冻保存的卵母细胞,便于在国际和国内问的长距离运输,代替活体引种,节约引种费用,减少疫病的传播,便于优良品种在国内和国际问的交流。冷冻保存有效的延长了世代间隔,利于育种工作的开展。卵母细胞的水分含量在%以上,冷冻过程中,%的水分会形成冰晶。细胞内冰晶的形成,使蛋白质结构发生不可逆的变化,导致卵母细胞死亡。卵母细胞的超低温冷冻保存实际上是一个脱水的过程,冷冻保存的关键就是要减少因细胞内冰晶形成而引起的细胞损伤“J率瞪希涠成撕χ饕@醋杂诮滴潞透次碌奈露茸;还獭5降至一定的温度时,首先在细胞外部形成冰晶,细胞内部尚未结冰而处于超冷状态。随着细胞外部冰晶逐渐增大,细胞外液渗透压升高,蓄积了较高的化学能。如果冷冻速度较慢,细胞膜两侧的渗透压与化学能差异将导致细胞质水分跨膜向细胞外渗透并继续结冰,引起细胞内进行性脱水,使细胞内的水分和冰晶形成减少。相反,如果冷冻速度过快,细胞内水分不及时渗透,细胞内外化学势能达不到平衡,当温度下降至某一临界点时就会导致细胞内形成冰晶而致