文档介绍：新疆大学
硕士学位论文
农杆菌介导的玉米醇溶蛋白基因转化紫花苜蓿的研究
姓名:刘晓颖
申请学位级别:硕士
专业:植物学
指导教师:李冠
20070601
删主要英文缩略词表鵅聚合酶链式反应十六烷基三乙基溴化铵缩写符号英文名称仃血中文名称卡那霉素链霉素潮霉素头孢霉素羧苄青霉素二钠乙酰丁香酮十二烷基硫酸钠光密度转/每分钟天分钟秒激动素萘乙酸氯苯氧乙酸三羟甲基氨基甲烷新疆大学硕士研究生学位论文争.:
论文作者签名:科斌欲日期:纠年石月,声明论文作者签名:司·袁欲日期:岔一,声∥月//日日期:枷辍卧拢琭日学位论文独创性声明学位论文知识产权权属声明本人声明,所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。文中依法引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人如违反上述声明,愿意承担由此引发的一切责任和后果。本人的学位论文是在学期间在导师指导下完成的,知识产权归属学校。学校享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为新疆大学。本学位论文属于:保密口,在年解密后适用于本声明。不保密口。朐谝陨戏娇蚰诖颉”导师签名:新握大学倾士研究生学位论文。
“牧草之王”。然而,苜蓿中含硫氨基酸含量很低,在种必需氨基酸中含量最低。但含硫氨基酸却是其它氨基酸所不能代替的。利用基因工程手段将富硫蛋白基因转入紫花苜蓿,提高牧草蛋白中含硫氨基酸水平具有十分重要的意义。本实验将与融合的玉米醇溶蛋白基因通过农杆菌介导转化紫花曹蓿,以提高苜蓿中的含硫氨基酸水平。根据该基因的保守序列设计引物,并在下游引物终止密码子前引入内质网驻留蛋白信号序列囝ü齈技术从玉米化幼苗基因组中扩增目的基因的开放阅读框。基因全长嗦个氨基酸,含硫氨基酸共占.%。并将该基因构建到植物表达载体上。建立紫花首蓿的组织培养再生体系。以予叶和下胚轴为外植体,培养基为改良的培养基,直接出芽并形成完整植株。通过冻融法将植物表达载体转化入农杆菌中。建立紫花苜蓿的转化体系。确定除菌的最佳抗生素是疞,下胚轴和予叶适宜的抗生素筛选浓度均为疞。通过农杆菌介导转化紫花苜蓿,检测证实外源基因已经转入紫花苜蓿中。将富硫的玉米醇溶蛋白基因转入紫花莒蓿,获得的转基因植株弥补了苜蓿缺乏含硫氨基酸的不足,为提高紫花苜蓿品质、改善反刍动物氨基酸营养结构奠定了研究基础。关键词:紫花首蓿玉米醇溶蛋白基因农杆菌介导:黄/肌醇/.//新疆大学硕士研究生学位论文
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引言匣ㄜ俎;蚬こ萄芯拷是世界上最重要的多年生豆科牧草,在我国已有两千年以上的栽培历史。它具有返青早,营养价值高,抗逆性强,适口性好等优点,无论其产量还是营养价值均居牧草之首,被誉为“牧草之王”。苜蓿既是重要的饲料作物,同时又是改良土壤、保持水土的重要植物。然而,尽管苜蓿优点甚多,但也存在种子细小、产量低、种子硬实率较高、花叶病危害大“⒎篡欢锎罅坎墒澈笠椎秒筒≯跻约叭狈硫氨基酸ǖ炔蛔阒Γ俎2祷葱矶嗖槐恪近几年来,由于分子生物学技术的迅猛发展使得植物基因工程的研究与应用越发普及。与传统育种方法相比,植物基因工程育种有其无可比拟的优越性。首先植物基因工程是在基因水平上改造植物的遗传物质,因此更具科学性和精确性;其次可以定向改造植物的性状,提高了育种的目的性和可操作性;再次植物基因工程技术打破了物种之间的生殖隔离,大大扩展了育种的范围。植物基因工程集现代高新技术蚩寺〖际酢重组技术、分子杂交技术、基因转化技术、组织培养技术等谝惶澹广泛应用使植物育种技术及方法进入了一个崭新的时代。常用的植物遗传转化技术。川.└司榈挤根癌农杆菌携带的质粒和发根农杆菌携带的质粒中含有一段称为狣的序列,该序列可以转移进植物细胞并整合到植物基因组中。将目的基因重组到狣区构建成合适的植物表达载体,并以根癌农杆菌或发根农杆菌作为中间介体感染受伤的植物细胞或组织,然后将它所携带的外源握系街参锘蜃橹校佣迪滞庠碊到宿主植物的转化。该方法主要用于双子叶植物,对单子叶植物就比较困难。该方法的优点是操作简单、易掌握,作用缓和,仪器设备少而且便宜,所用的外植紫花苜蓿新疆大学硕士研究生学位论文
体种类多样,更主要的是利用农杆菌转化法转移的外源基因在植物基因组达和遗传到后代。但是该方法需要事先构建合适的植物表达载体和建立目的植物的再生体系。.蚯棺;基因枪法由美国康耐尔大学的岢觥F浠驹硎墙庠碊