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农杆菌介导脂滴包被蛋白基因脚转化烟草的研究希唤刈橹柿5既敫┡└司砌砌幽渤曲校ü浣榈冀如譥缛缟聚鮰筺砌癕妇组缀摘要:为开发新的抗茵核病基因,针对抗病相关的脂滴包被蛋白基因蹦,设计了分别带有酶切位点虰埘对引物,┰龅交虮模盖斜牟⒘拥街参锉泶蹦基因转化到烟草中;获得了株抗性转化株,安庑蚍治黾ㄑ粜灾仓晡辏琑检测到基因占谄渲心芄槐泶铮煌ü又趾伺桃鸷筒菟岽硎匝椋砻鞅幕蚩墒寡滩萏岣吡瞬菟崮褪竚翻“,矗“埘埘幽西鲫籺核盘菌Γ琫,雒鎠订巧可引起严重的牛伯庆,汪文静,宋洪英,谢响明水平,从而对茵核病具备一定的抗性。本实验研究了潜在功能基因口,的抗病性,为植物抗菌核病的研究奠定了基础。关键词:脂滴包被蛋白;农杆菌介导的转化;转基因烟草;核盘菌;抗性文献标志码:г籭癷船船。以阤<觙翨鄆愕肋盯∥‰玑琫如西鱡詀¨璖辬簆;鱝厶粕矗酰簉科、豆科、茄科等在内的嘀种参铮贾轮仓旮烂枯死,降低作物产量,每年造成重大经济损失¨。】。将几丁质酶⑵暇厶敲肛一、草生物楼琓:,:舯甧.。,:载体中图分类号:论文编号:—琒植物病害菌核病,其宿主范围非常广泛,包括十字花菌核病主要依靠农药防治,由于抗病品种资源较少,病原菌在重灾区逐渐出现耐药性,防治效果有限,生物防治和植物基因工程是目前的研究热点,已报道酸氧化酶、草酸脱羧酶楼珽鰅簄甤。中国难学ū本┝忠荡笱锟蒲в爰际跹г海本﹍孚一,韌,珼圹踣酰琣锔綼唬θ鐁扬西鰁,:占—籘一,—家,.—.占,口..基金项目:转基因生物新品种培育重大专项“抗大豆菌核病重要基因克隆及功能验证”—第一作者简介:牛伯庆,男,年出生,河南林州人,硕士,研究方向:资源微生物。通信地址:北京海淀区清华东路号北京林业大学生物通讯作者:谢响明,男,年出生,湖北云梦人,教授,博士生导师,研究方向:微生物。通信地址:北京海淀区清华东路号北京林业大学收稿日期:..,修回日期:..。
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’;下游:籧骳’;扩,经分析表明它和绿僵菌才缙脾黙⌒脂滴包被蛋白同源俊NQ芯勘幕虻墓δ芗捌抗病潜力,构建了跗基因的植物表达载体蹦在植物体内对菌核病的作用奠定基础。.康幕蚶┰龈萁呕蛐蛄猩杓屏艘铮柿#厥毡幕蚱魏驮靥宕笃胩褰又志俊H∽V嗷蜓滩菀镀谝生生防菌链孢粘帚霉,,幕鳍蜊鮟∞豧Ⅱ的等基因转入植物体内后可以有效提高目前的抗菌核病功能基因种类较少,为开发新的抗病基因,课题组采用抑制削减杂交技术从重寄菌核差异表达基因文库中获得了蹩共∠喙鼗烟草中,表达成功后进行相关的抗病性鉴定,为揭示牧嫌敕椒材料来源甌—靥濉⒑伺叹芍泄┮悼蒲г豪靥濉和大肠杆菌蛴杀臼笛槭冶4妗Q滩軳杀本┝忠荡笱主要试剂限制性内切酶、试剂盒等购自中科瑞泰生物公司,引物合成、测序由北京奥科鼎盛生物公司完成。一—柿ND0謇┰觯从Τ绦蛭#∮脁虰双酶切扩增段,∞樱菇ū泶镌靥錺上筛选转化子,特异性觳狻;滩用冻融法将口惺芴赴校赮培养基∞/上筛选,提取转化子质粒进行定。羧∽;】椋诰褐薪Ⅱ取出置于无菌滤纸上吸去菌液。又钟诜只嘌天。R频椒只嘌后切下并转入生根培养基..肿蛹ㄈ【强剐陨秆〉难滩菀镀中提取D0褰蠵扩增及测序鉴定;阳性株系提取魑D0澹肦欣┰觯皇用引物为上游:瓹增产物进行%琼脂糖凝胶电泳检测。.共⌒圆舛面上制造伤口后接种培养好的核盘菌菌饼孪惹