文档介绍：实验八酶促反应的影响因素
一、目的要求
、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。
、pH、激活剂、抑制剂影响酶促反应速度的方法。
 
二、实验原理
在酶促反应中,酶的催化活性与环境温度、 pH有密切关系,通常各种酶只有在一定的温度、pH范围内才表现它的活性,一种酶表现其活性最高时的温度、 pH值称为该酶的最适温度、最适pH。
在酶促反应中, 酶的激活剂和抑制剂可加速或抑制酶的活性,如***化钠在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂,而硫酸铜则是它的抑制剂。
本实验利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的颜色反应,定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中各种因素对其活性的影响。
淀粉(遇碘呈蓝色)→紫色糊精(遇碘呈紫色)→红色糊精(遇碘呈红色)→无色糊精
(遇碘不呈色)→麦芽糖(遇碘不呈色)→葡萄糖(遇碘不呈色)。
所以淀粉被唾液淀粉酶水解的程度,可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断,以此反映淀粉酶的活性,由此检定温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。
 
三、实验器材
试管和试管架、恒温水浴、冰浴、吸量管(1 mL6支、2 mL4支、5 mL4支)、滴管、量筒、玻棒、白瓷板、秒表、烧杯、棕色瓶。
 
四、实验试剂
 
(唾液淀粉酶液):每位同学进实验室自己制备,先用蒸馏水漱口,以清除食物残渣,再含一口蒸馏水, min后使其流入量筒并稀释至200倍(稀释倍数可因人而异)混匀备用。
%淀粉溶液A(%NaCl):将1 g***化钠混悬于5 mL蒸馏水中,搅动后,缓慢倒入沸腾的60 mL蒸馏水中,搅动煮沸1 min,冷却至室温,加水至100 mL,置冰箱中保存。
%淀粉溶液B(不含NaCl)
:称取2 g碘化钾溶于5 mL蒸馏水中,再加入1 g碘,待碘完全溶解后,加蒸馏水295 mL,混匀贮于棕色瓶中。
%NaCl溶液
%CuSO4溶液
。
pH
mol/L磷酸氢二钠溶液体积/ mL
mol/L柠檬酸溶液体积/ mL
 
五、操作步骤
取3支试管编号,按下表进行操作:
试管号
淀粉酶液体积/ mL
酶液处理温度/
℃,5 min
/ mL
1%淀粉溶液A体积/ mL
反应温度/
℃,10 min
观察结果
1
2
3
1
1
1
0
37~40
70左右
2
2
2
1
1
1
0
37~40
70左右
 
上述各管在不同的温度下保温反应10 min后,立即取出,流水冷却3 min, 向各管分别加入碘液1滴。仔细观察各试管溶液的颜色并记录,说明温度对酶活性的影响,确定最适温度。
取1支试管,加入1%淀粉溶液(A)2 mL、 mL、淀粉酶液2 mL,摇匀后,向试管内插入一支玻棒,置37 ℃水浴保温。每隔1 min用玻棒从试管中取出1滴混合液于白