文档介绍：超广谱一内酞胺酶基因及新型一内酞胺酶特性的研究
摘要
超广谱一内酞胺酶是可水解三代
头抱菌素和单环一内酞胺类抗生素的一大类一内酞胺酶,主要由肺炎克雷伯菌
和大肠埃希菌产生。近年来产菌株在临床上的分离率不断增加,己经成
为院内感染的主要病原菌之一。有关的研究,尤其是基因水平的研究是
目前国际上临床微生物学界研究的热点之一。在我的研究报道较少,因此我们就,尤其是
基因方面作了如下研究收集浙江省个地区医院和浙江大学医学院附属第一
医院临床分离的株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌,评价表型的筛选方
法,鉴定产菌株中型酶基因型分布情况,并研究一种新型
内酞胺酶的特性。
超广谱一内酞胺酶的检测方法比较及相关基因学研究
目前表型检测方法有双纸片法法、
三维试验、法及年全美临床实验室标准化委员会推荐的
酶抑制剂增强的纸片扩散法和酶抑制剂增强的肉汤稀释法
,但由于后两种方法的试剂费用贵、购买及操作不便,
而临床微生物学实验室需要一种简便、易行、可靠、经济的表型检测方
法。我们采用法、法检测株临床分离的大肠埃希
菌和肺炎克雷伯菌、株标准产酶大肠埃希菌及株大肠埃希菌
中产的情况。以检测结果为标准,评价法、法和
法的检测结果。发现法和法的特异度均较高,而灵
敏度分别为和,提示与法和法相比,是
一种可以替代的简便易行的表型检测方法。对株和
检测结果不符合的细菌进行一内酞胺酶基因分型,发现其中株细菌产生的是
非非型一内酞胺酶,另株产生的是不属于的型
内酞胺酶,造成表型与基因型检测不符合的原因可能与细菌型酶产量高
有关。
浙江省产超广谱一内酞胺酶菌株型一内酞胺酶基因型分布
采用,年”一年”浙“省个地区医“和浙江大学
医学院附属第一医院临床分离的株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,共筛选出
株产菌株。用聚合酶链反应和斑
点杂交的方法对其所产进行初步分型,其中单独产型和单独产
型内酞胺酶的细菌分别占和,同时产型的占
产非非型的占。浙江省内各地区基因型流行情况不同
将其中株细菌所产的型一内酞胺酶基因片段分别克隆入
载体,双脱氧链终止法测定核昔酸序列,序列分析结果在网上查询比对,确定
基因型,发现型株,型株,型株,
型株和型株,提示和型是型一内
酞胺酶在产大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的主要流行基因型。厂
新型一内酞胺酶的发现及其特性的研究
乙采用”法获得浙江省宁波和”山”区“床分“的株表”鉴定“产
肺炎克雷伯菌所产型一内酞胺酶的基因,该片段含个核昔酸
基因克隆、序列分析结果显示核昔酸及相应的氨基酸序列在查询无相
同序列,为新发现的一种一内酞胺酶型登录号
将该型基因片段与表达型载体连接后转入大肠埃希菌中表达,测定重
组细菌所表达的重组蛋白等电点为重组细菌酶抑制剂增强的纸片扩散法鉴
定为非产细菌脉冲场凝胶电泳研究发现这株临床分离株相互之间的
亲缘关系较小,说明产型酶菌株有可能是独立发生的,不存在耐药菌
株的克隆传播接合试验的结果提示型一内酞胺酶基因位于质粒上。
以上研究表明
以检测结果为标准,与法和法相比,是一种简便、
特异、敏感、经济的表型检测方法,可在临床实验室中推广使用。
在浙江省产大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,型是其产生的主要
内酞胺酶基因型。型一内酞胺酶有种基因型,其中和
型是主要流行型一内酞胺酶基因型,且不同基因型型一内酞
胺酶在不同地区流行情况不同。
浙江省宁波和舟山地区株临床分离的产肺炎克雷伯菌中首次发现一
种新型一内酞胺酶型。该酶为非,等电点为,接合试验显
示型基因由质粒携带,各产型酶临床分离株之间亲缘关系较
小。厂
了、产口
关键词超广谱一内酸胺酶一内酞胺酶聚合酶赫序列分析脉冲
场凝胶电泳等电聚焦分析接合试验
、、
,
一
化
缩略语
缩写字英文名中文名
超广谱一内酞胺酶
头抱他
头抱曲松
头抱唾肪
户口, 氨曲南
阿莫西林一克拉维酸
克拉维酸
双纸片法
酶抑制剂增强的肉汤稀释法
全美临床实验室标准化委员
会
美国疾病控制中心
阳离子调节肉汤
最小抑菌浓度
欧洲分子生物学实验室
卡那霉素
氨节西林
等电点
脉冲场凝胶电泳
聚合酶链反应
酶抑制剂耐药的一内酞胺酶
酶抑制剂耐药的型酶
限制性片段长度多态性
连接酶链反应
单链构象多态性
前言
一课题背景
革兰阴性杆菌引起的严重感染是临床上造成病人死亡的主要原因之一,治
疗药物主要是三代头抱菌素和单环一内酞胺类抗生素。但