文档介绍：河北医科大学
博士学位论文
腺病毒介导IL-24基因对U251胶质瘤细胞的杀伤作用及相关机制
研究
姓名:韩硕
申请学位级别:博士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:闫蕴力
20090401
腺病毒介导基因对胶质瘤细胞的杀伤作用及相关研究要摘神经胶质瘤是人类最常见的脑部肿瘤,已成为岁以下儿童肿瘤致死的第二大病因,是导致~岁成年男性和~岁女性肿瘤死亡的第四大病因。目前,恶性胶质瘤的常规治疗手段质跫臃呕治疗困难、远期效果差,死亡率高。对于恶性程度高的胶质瘤患者,生存期短、晟媛市∮%。怎样改善胶质瘤的治疗效果,是临床面对的一个难题。近年来,随着分子生物学、分子遗传学的研究进展,对于肿瘤的基因治疗方面取得了长足进步,为提高恶性胶质瘤的治疗效果,增加患者的生存率开拓了新的思路。白细胞介素.,.窍赴蜃影捉樗易宓新成员,由于最初在人类黑色素瘤中发现,因此也被称为黑色素瘤分化相关因子..。研究发现,.对多种肿瘤细胞伟⑶傲邢侔⑷橄侔⒙殉舶⒁认癌、肝癌等醒≡裥缘囊种谱饔谩4送猓琁牖啤⒎帕葡嘟岷的研究表明,将。基因转染入人非小细胞肺癌的细胞后,可增强此肿瘤细胞对放射治疗的敏感性,而同时接受照射的人正常成纤维细胞则未受此放射线照射的影响。,而对正常细胞没有损伤作用的生物学特点,现已成为基因治疗的候选基因,并成功用于期临床研究。目前,,。本研究应用新型重组腺病毒载体甀,,应用⒘魇较赴酢⑺ü馊旧ā荧光染色、凋亡试剂盒和单细胞凝胶电泳籗等技术,。同时用赴窒笛椤⑾赴凼笛检测药物作用后肿瘤细胞侵袭、迁移能力的改变。,中文摘要和產.
、迁移及杀等细胞信号转导通路蛋白的表达水平变化。同时应用流式细胞术、双荧光染色观察蛋白抑制剂作用后,。应用印迹、、流式细胞术、免疫细胞化学的方法检测、鞍椎谋泶锉浠榭觥R云诟钊氲牧私釯可能的效应途径和作用靶点,为进一步提高临床神经胶质瘤治疗效果提供研究基础。目的:构建重组腺病毒载体.。方法:先用蚐盖蠥柿#玫侥康奶醮缓再用蚐盖衟质粒,得到线性化的载体条带,进行片断连接,转化,。随后用兔切的方法对重组一质粒进行鉴定;最后经全自动核酸分析仪上进行序钡定证实连接正确。制备感受态细胞,进行转化,大量制备质粒恢笥盟柿9沧H细胞,产生重组腺病毒.。进行病毒扩增、纯化,计算病毒滴度,按照公式:病毒滴度凰阳性细胞数×病毒上清稀释倍数/结果:,并用酶切、;.,并进行了扩增和纯化。测得病毒滴度为结论:,。伤作用目的:、迁移能力的影响。方法:用⒘魇较赴酢⑺ü馊旧āü馊旧ā凋亡试剂盒和单细胞凝胶电泳籗等技术,。痬
用。同时用赴窒笛楹拖赴凼笛检测药物作用后对肿瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:与空白对照组和空载体组相比,.能够抑制人细胞的增殖,诱导细胞凋亡,,细胞杀伤率增加明显。结果表明,.对细胞细胞周期进程有抑制作用,可使细胞周期被阻滞于/凇M保芯勘砻鰽甀组可显著降低赴那窒颓ㄒ颇芰Α结论:.能够诱导人赴蛲觯盏糋期阻滞,降低肿瘤细胞的侵袭和迁移能力。:。方法:.基因转染细胞小时后,。同时,应用⒘魇较赴酢⑺ü馊旧ü鄄霦、鞍滓种萍罰、作用后,,以及细胞内相关蛋白表达水平的变化。结果:结果表明:,蛋白表达..,明显增强.=。,。结论:≡裥杂盏嫉蛲鲎饔茫赡苡肫上调并激活表达有关。而阻断揪犊山徊教岣逫基因对肿瘤细胞的杀伤。:观察外源性一基因对、以及拓扑异构酶中文摘要,、
。表达挠跋臁方法:应用印迹、、流式细胞术、免疫细胞化学的方法检测、和仪蛋白的表达变化情况。结果:印迹结果表明,.组蛋白表达..,较