文档介绍：河北医科大学
博士学位论文
逆转录病毒介导IL-18、IL-24基因抑制大鼠C6胶质瘤细胞体外
增殖和体内致瘤性的研究
姓名:李文玲
申请学位级别:博士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:阎蕴力
20050401
中文摘要
逆转录病毒介导基因
抑制大鼠胶质瘤细胞体外增殖和体内致瘤性的研究
摘要
目的月部胶质瘤尤其是高级别胶质瘤是严重危害人类健康的疾病
之一。因其向脑组织内呈浸润生长,脑组织又缺乏有效的免疫系统,故常
规治疗〔手术加放化疗效果差且易复发,病人的平均生存期不足一年,
是目前神经外科学界正着力解决的问题。随着分子生物学的发展,肿瘤基
因治疗的新方法在不断被发现。通过各种载体将具有抗肿瘤作用的基因导
入到肿瘤细胞内,抑制肿瘤细胞的生长甚至使肿瘤细胞的恶性行为发生逆
转,是目前实验中常规应用的基因治疗的方法。
人体的免疫系统可消灭外来抗原、清除体内产生的衰老细胞及异常增
殖的肿瘤细胞,而肿瘤在体内得以形成的原因是体内的部分肿瘤细胞具
有逃逸免疫监视的功能,故目前基因治疗的研究着重于免疫基因治疗,
即将免疫活性物质如细胞因子的基因导入肿瘤细胞内。转染了细胞
因子基因的肿瘤细胞,不但能分泌细胞因子发挥免疫调节和直接抗肿瘤
作用,而且该肿瘤细胞的致瘤性降低,免疫原性增强,使肿瘤细胞表面
所有潜在的肿瘤相关抗原均有可能被加工和提呈,诱导特异的抗肿瘤免
疫,从而克服肿瘤细胞的免疫逃逸机制。然后将此种经过修饰的肿瘤细
胞注射至肿瘤瘤体内或机体的皮下,以使肿瘤局部产生具有抗肿瘤效应
和有免疫调节活性的物质,调节机体的免疫系统,杀伤肿瘤或抵抗肿瘤
的发生和发展,对肿瘤进行治疗和预防。有实验证实将细胞因子的基
因直接导入肿瘤细胞内不但可使肿瘤局部获得有效的抗肿瘤效应,而且
可激活自身免疫系统获得持久、特意的抗肿瘤免疫。
传统观点认为中枢神经内存在着完整的血脑屏障且不具备淋巴组
织,所以是不受免疫监视的“免疫获免器官”。但新近研究表明中枢神
经系统可以通过颈部淋巴结获得系统的免疫效应,中枢神经系统的抗原
能被提呈给外周的免疫细胞,外周的具有免疫活性的淋巴细胞再迁移入
中枢神经系统内发挥作用。己有动物实验证实等细
胞因子可以有效治疗和预防颅内胶质瘤的发展。并且有些研究己进入二
中文摘要
期临床阶段。随着有关研究的不断深入,细胞因子介导的免疫基因治疗
将为脑部恶性胶质瘤的治疗开阔新的前景。
白细胞介素是一种多功能的细胞因子,
具有抗肿瘤、抗病原微生物、抗超敏反应等生物学特性口近年来研究表明,
具有显著的抗肿瘤作用和潜在的临床应用价值,可促进细胞增殖
和增强细胞分泌,同时还能促进细胞的细胞毒作用,包括
促进介导的细胞的细胞毒活性和穿孔素介导的细胞传
统杀拐活性。并能直接诱导人骨髓单核细胞株的凋亡和配体的
表达。另外,还可通过抑制肿瘤新生血管形成来抑制肿瘤的生长。因此,
作为肿瘤免疫基因治疗的候选基因受到越来越多关注。
白细胆介素一是一种新发现的具有细
胞因子特性和抑瘤因子功能双重功效的蛋白质。关于对肿瘤细胞
生长的影响,有研究注意到,随着恶性黑色素瘤的形成、进展和转移,
在细胞中的表达逐渐下降而经生长抑制和分化诱导等方法治疗该肿瘤
后,的表达可再度上升,因此认为基因具有抑癌基因的特性,
与抑制肿瘤的生长,诱导肿瘤逆转和分化有关。而且当用质粒或腺病毒载
体将基因转入乳腺癌、肺癌等细胞株后,可选择性诱发肿瘤细胞的
凋亡。外源性基因还可通过抑制肿瘤局部新生血管的形成,达到抑
制肿瘤生长的目的。因此,作为一种具有抗肿瘤免疫活性的细胞因
子,其作用机理及潜在的临床应用价值正在引起广泛的关注。
本研究通过逆转录病毒载体将基因转入胶质瘤细胞内,
探讨其体内外的增值性和致瘤性,并力求阐明其作用机理,为二者进一步
应用于胶质瘤的免疫基因治疗和免疫预防奠定基础。
材料与方法
逆转录病毒介导基因在大鼠胶质瘤细胞中的表达
细胞系的建立质粒、以及和
两种包装细胞由日本千叶县癌中心病理研究部
田川雅敏部长惠赠。细胞由河北医科大学基础所细胞生物室保存。
获取重组逆转录病毒应用,将转染到细
胞中,经筛选后,收集抗性细胞克隆的培养上清
内含逆转录病毒口在存在下,将培养上清与
中文摘要
细胞共同培养进行再次病毒包装。收集具有抗性、高表达
的细胞克隆培养上清含病毒,用于感染细胞。
重组逆转录病毒感染细胞增殖期的细胞,加入含
的病毒培养上清后加入筛选阳性克
隆。后挑取具有抗性的阳性克隆分别扩大培养。
流式细胞术鉴定分析将上述具有抗性的阳性细胞