文档介绍：华中科技大学硕士学位论文
缩略词(Abbreviation)
英文缩写英文全称中文名称
BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白
ELISA Enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验
EV Enterovirus 肠道病毒
HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶
Id-ELISA Indirect enzyme linked immunosorbent assay 间接酶联免疫吸附试验
IMB ic beads 免疫磁珠
MB ic beads 微磁珠
MAb Monoclonal antibody 单克隆抗体
OD Optical density 吸光度/光密度
OPD O-phenylenediamine 邻苯二胺
PV Polio virus 脊髓灰质炎病毒
PBS Phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲溶液
PAb Polyclonal antibody 多克隆抗体
PFU Plague-forming units 噬菌斑形成单位
SN test Serum neutralization test 血清中和试验
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独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师的指导下进行的研究工作及取得的
研究成果。尽我所知,除文中已标明引用的内容外,本论文不包含任何其他人或集体
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日期: 年月日
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日期: 年月日日期: 年月日
华中科技大学硕士学位论文
大肠杆菌 f2 噬菌体多克隆抗体的
研制及应用
研究生:徐礼源
导师:谷康定教授
中文摘要
大肠杆菌 f2 噬菌体是一种 RNA 病毒,其有些特性与肠道病毒极为相似,能像粪
大肠菌群那样在人和动物的肠道中存在,且其在水中的存活时间、对氯消毒的抵抗力
也与脊髓灰质炎病毒相近。因此,国内外研究人员认为,大肠杆菌 f2 噬菌体是一种比
较理想的水中肠道病毒污染的指示物,并将它广泛用于饮用水消毒效果评价,污水与
环境水体中肠道病毒浓度、存活状况评估,环境监测方法与技术研究等方面。传统的
f2 噬菌体检测方法有浊度比色、空斑实验等,后者既可定性也可定量,是一种常用的
实验方法。但是,它需要培养宿主菌和严格的无菌操作等繁琐过程。寻找更加简单、
快捷、经济、可靠的 f2 噬菌体检测方法,是研究者不懈努力的方向。大量研究资料表
明,能够满足上述检测要求的可行方法,有免疫层析、ELISA 等免疫学方法。但是到
目前为止,针对 f2 噬菌体相关报道几乎未见。因此,本研究尝试制备兔抗 f2 噬菌体
多克隆抗体,以摸索出一条制备其抗体的方法和途径,为相关的单克隆抗体制备及 f2
噬菌体的检测研究提供最基础的实验素材。f2 噬菌体为不含包膜的病毒颗粒,核衣壳
表面含有丰富的抗原决定簇,用它免疫动物,不同的抗原决定簇能刺激不同的淋巴细
胞而产生针对不同决定簇的抗体。通过筛选可以获得具有高亲和力多克隆抗体。
本研究以大肠杆菌 f2 噬菌体为免疫原,以日本大白兔为受试动物,采用皮下多点
注射的方式制备多克隆抗体,并通过纯化,获得了高浓度、高效价的兔抗 f2 噬菌体
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IgG。初步探讨了将多克隆抗体与微磁珠结合,浓集、分离水中大肠杆菌 f2 噬菌体的
过程,为水中病毒检测提供相关参考数据。
第一部分大肠杆菌 f2 噬菌体多克隆抗体的研制
目的:制备大肠杆菌 f2 噬菌体多克隆抗体,分离纯化抗体。
方法:增殖 f2 噬菌体,利用超速离心的方法纯化 f2 噬菌体,选择 3 只 8 周龄纯种大
白兔,采用皮下注射法,多次多点注射纯化的大肠杆菌 f 噬菌体,用血清中和试验与
间接 ELISA 法检测抗血清效价,当效价在 1:3200 以上