文档介绍：石河子大学硕士学位论文用农杆菌瞬时表达蛋白提高烟草原生质体转化率的研究芹生命科学学院指导教师申请学位门类级别学科、专业名称究方在学彦祝建波副教授硕生物化学与分子生物学植物基因工程中国新疆石河子年月研生向所院王理士分美号:
用农杆菌瞬时表达蛋白提高烟草原生质体转化率的研究研究生:王彦芹锘в敕肿由镎导师:祝建波副教授摘要本项研究旨在利用根癌农杆菌转移过程中三个协助转移的关键性基因:目的基因瑅,虶分别连在瞬时表达载体上。建立了烟草原生质体关键词:农杆菌毒蛋白基因;瞬时表达蛋白;原生质体;提高;转化效率论文类型:基础研究τ醚芯研究表明,根癌农杆菌口细胞质粒毒性区基因的表达与狣的转移有关。腥龉丶缘鞍祝孩鰎,F渲孝鰎蛋白表现为拓扑异构酶活性,它可以使映菪妥1湮K沙状态;Ⅵ鞍啄芮懈罴撼仕沙谔腡,使霰呓绮笨冢沟チ碩得以释放;而鞍资堑チ碩的结合蛋白,可以使纬梢桓鱿赋さ暮酸蛋白复合体一复合体源吮;不被胞内外的核酸酶降解。复合体依此穿过根癌农杆菌和植物细胞壁及细胞膜,并进入细胞核,最终整合进入植物核基因组。瑅,葱躺ü獾鞍谆騁转化烟草原生质体,为将来结合花粉管通道法转化其他植物,探索出一条转化效率高、不受宿主限制和再生系统限制的转化途径打下基础,给植物转基因工作在科研和技术上带来极大方便。本实验设计了一对分别含蚗盖形坏愕囊铮肞技术,克隆了┩寥琅└司鶷柿6拘郧鞍注鰎基因,并将基因构建到原核表达载体上,同时获得了原核表达蛋白。构建了瞬时表达载体猵⒔稳定培养体系,在含虻闹柿5ザ雷;侍宓拇碇校臣平峁允咀;率最低,在%左右;在含ⅱ鰎、虻闹柿7直鸾榈嫉淖;校;率与对照相比有不同程度的提高,其中含Ⅵ基因的质粒分别介导的转化明显高于由榈嫉淖;锏搅プ笥遥鳹基因介导的转化率约为ァ在含、虻墓餐饔孟拢侍宓淖;拭飨愿哂谄渌拇恚达到了.%。
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前言嬖谑蹦苁褂衩自侍宓淖;侍岣叩ァ】。很多研究都得出在自从农杆菌介导的第一例转基因植株问世以来,人们为了提高转基因效率,对农杆菌介导的机理作了深入的研究。和冉岷吓└司牖蚯狗ù丛炝恕芭感枪”法,将蚔基因连同瓺上的目的基因一同用基因枪打入植物细胞,表达的蚔在植物细胞中切割和转移狣进入植物细胞核,用这种方法转化烟草和水稻已获得成功;等年证明利用“农感枪”法在存在时能使玉米原生质体的转化效率提高到.%,而在、嬖谑弊;侍岣叩慕崧邸人类要解决新世纪所面临的粮食问题,可能在很大程度上要依赖于农杆菌转化等生物工程技术的发展。本研究利用农杆菌毒蛋白基因、躺ü蛋白基因;滩菰侍澹L剿饕惶醪皇芩拗飨拗啤⒉患尤魏蔚孜铩⒓虮阋行、不需要组培直接通过花粉或种质介导获得转基因植株、更适宜于大田操作的转化方法提供理论依据,使人类能更好地按自己的意图实现对植物的改造与利用。本研究的创新点在于直接用质粒和烟草原生质体共培养法使谘滩菰侍中得到了瞬时表达,而且最高转化率达到了—%,此方法比起“农感枪”法既经济,又便于在田问操作,有一定的应用价值。
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揪时间:刎年//月/王秀等研究生签名:王焉百研究生签名:上万呵时间:二三理上年//月学位论文独创性声明学位论文版权授权书时间:≥棚卜年时间:一誓阥拢H本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人己经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确的说明并表示谢意。本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名导师签名拢痮日日
第一部分文献综述第一章农杆菌介导法转化的研究进展攀└司榈甲;幕农杆菌虻幕罨癡、与春咸宓男纬几种单子叶植物;而近几年,由于在一些重要的单子叶植物以及真菌中应用农杆菌转化行了广泛的研究,特别在虮嗦氲鞍椎慕峁辜肮δ堋的形成及转运等方面开始探索宿主植物细胞内一些因子对R坪驼系挠跋欤蛭E└司灾参锵膜和核膜。R乒炭苫治H缦录父霾街瑁└司灾参锵赴氖侗鸷透阶牛农杆菌对植物信号物质的感受;