文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
SDF-1修饰人骨髓间充质干细胞体外培养鉴定的研究
姓名:梁雪
申请学位级别:硕士
专业:内科学(血液)
指导教师:孔佩艳
20060501
指导教师签名:出桌论文作者签名:礁翌婆塑第三军医大学研究生学位论文独创性声明日期:型￡:圭:三第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书期:型:.豪论文作者签名:导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究并表示谢意。校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查秉承学校严谨的校风和科研作风,本人申明所呈交的论文是我本人在成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影、缩印或其他手段保存论文。日
中英文缩写一览表链心美国标准菌库骨髓间充质干细胞碱基对对氨基联苯胺焦碳酸二乙酯溴化乙啶流式细胞术胎牛血清异硫氰酸荧光素粒细胞集落刺激因子造血微环境单个核细胞信使核糖核酸问充质干细胞磷酸盐缓冲液磷脂酰乙醇胺缩写英文全称中文全称互补羌易迩骰蜃邮芴澹二甲亚砜脱氧核糖核酸绿色荧光蛋白胶原纤维酸性蛋白移植物抗宿主病造血干细胞四唑盐比色法新霉素璐瓹—‘
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奘稳斯撬栉食渲矢上赴逋馀嘌ǖ难芯摘要造血微环境损伤是引起某些疾病及造血干细胞移植时造血重建不良的重要原因。骨髓基质细胞是造血微环境的主要成分,对造血干,祖细胞的粘附作用是促使造血干,祖细胞回髓定植和进一步增殖分化的基础。而骨髓间充质干细胞珺谴嬖谟诠撬柚谐煅8上赴琀以外的另一种干细胞,不仅直接参与生成造血微环境支持造血,在适宜的条件下还可发育、分化为具有支持造血功能的多种骨髓基质细胞。因其具有高度自我更新能力和多向分化潜能等,是细胞替代和基因治疗理想的细胞来源。尤其在造血干细胞移植过程中,可以纠正或改善造血微环境的损伤,从而促进移植后造血和免疫功能的重建。,饕S晒撬杌氏赴合成和分泌,同时,部珊铣伞⒎⒒肪车闹匾W槌刹分。人基因定位于号染色体,根据其编码氨基酸序列归属于趋化因子亚家族,与其表达于造血干细胞表面的唯一受体岷喜斡朐煅5牡骺亍T谠血干细胞动员、归巢、定植和增殖中发挥重要作用,并可单独或协同瓹、细胞因子通过细胞信号转导系统维持造血干细胞的正常功能。本实验在成功分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞和构建..真核表达载体的基础上,将重组质粒传染入,并检测其瞬时转染效率,为进一步的体内外实验研究修饰栽煅5闹С肿饔玫一、共采集例骨髓标本,均取自第三军医大学附属新桥医院血液科岁至岁正常、缺铁性贫血及特发性血小板减少性紫癜患者;携带的质粒靥骞鹤訟荆琋;.真核表达载体为本实验室保存。二、通过密度为/腜液,利用密度梯度离心法分离出人骨髓单个目的:。方法:第三军医大学硕士学位论文
.真核表达载体。素对细胞的影响;,通过荧光显微二、.真核表达载体的构建:,通过贴壁筛选法建立的体外培养体系,并通过一系列检测方法对所培养的细胞进行鉴定。三、/,并将其定向克隆到一真核表达载体中,构建四、脂质体介导未去内毒素质粒—.转染,观测内毒镜观测绿色荧光蛋白的表达和半定量法检测其瞬时转染效率。五、通过预实验确定获取稳定转染细胞所需的筛选浓度。实验主要结果如下:一、人骨髓间充质干细胞的生物学特征及鉴定:细胞主要呈“成纤维样”,但体积较大、形状不规则、胞浆突起多,细胞核大而疏松,核仁明显。流式细胞仪检测:阳性率ァ难粜月ィ籆癈表达阳性蚱溆ü夥植记域和对照管细胞的荧光分布区域相重叠,不适宜用阳性率表达,而是用荧光强度代表其抗原表达强弱:为.;。细胞周期及透射电镜检测提示细胞处于相对原始状态。免疫细胞化学染色显示:、、胶原蛋白呈阴