文档介绍：中国医科大学
博士学位论文
胶原蛋白和骨架蛋白及钠/氢交换抑制剂对糖尿病心肌病变的研
究
姓名:吴伟
申请学位级别:博士
专业:内科学
指导教师:张锦
切取左心室褡橹娇椋环荼瓯玖⒓捶湃攵炒婀苤校湃胍旱V檬酸缓冲液,再加氯胺煸妊趸辉偌ザ远北郊兹﹍℃水浴色测定。。对照标准曲线,求得羟脯氨酸含量,然后换算成每克心肌组织中羟脯研究糖尿病大鼠不同病程心肌胶原蛋白和骨架蛋白含量的变化,阐明两者对糖尿病心肌病变发生的作用以及研究钠/氢交换抑制剂对糖尿病心圃焯悄虿〈笫笮募∧P停禾逯—狣鼠。随机分为六组:糖尿病大鼠鲈伦鼠鲈伦实验。各组分别于糖尿病大鼠模型成功后鲈隆个月和鲈陆懈保存,待测心肌羟氨酸含量;一份标本ジ6砹止潭,洗,进行石蜡包埋,待测心肌细胞内胶原蛋白和转化生长因子及肌动蛋白含量。舛ㄐ募〗涸芎浚阂孕募◆前彼崴嚼创硇募〗涸芎俊以氯胺ú舛歉彼岷俊3迫”匙笮氖倚募∽,取出后冰水浴;最后一步一型分光光度计Ρ氨酸含量,再乘以吹眯募〗涸芎俊肌细胞钙超载的影响。方鼠只,其中只健康大鼠。只经腹腔注射链脲佐菌素琒公司·~,旌蟛舛ㄑL恰/L悄虿〈和健康大鼠鲈伦、健康大、健康大鼠鲈伦。每组大鼠各凰婊秆∪腔内注射%戊巴比妥进行麻醉后,打开胸腔,摘取心脏,∩锨逡簂幽中文摘要目的法、糖尿病大鼠鲈伦、糖尿病大鼠鲈伦
摘取心脏,取出糖尿病鼠的心尖部组织,切成约大小的碎块,用脂浸透包埋,温箱聚合,超薄切片,透射电镜观察、摄片。色:使用陨约梁小H袅笏邮约梁兄蠥,琧试剂各.~,旌蟛舛ㄑL恰/L悄虿∈螅周内存活只%胰蛋白酶溶液分次消化,离心,将收集到的心肌细胞用含%胎牛血清的培养基重新悬浮嗝顾鳎疵顾兀琾.,置于、含心肌型《鞍仅一检测。采用石蜡切片,切片厚抗原染色如下程序:夭F劳哑链恚貉∮肞狶@唐笾每鞠允骨衅裘苷掣健切片常规脱蜡至水。袅笏孪热修复抗原:将切片浸入枸橼酸盐缓冲液.,电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔螅锤磍一巍@淙春驪洗涤。甩去多余液体,不洗。渭:∈鸵豢小鼠或兔,婀埂洗种印次。渭由锼鼗每剐∈驣,一℃滴,混解剖学后加至切片。室温显色,镜下控制反应时间,约在馏水洗涤。苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。一:托募⌒蚫—鞍谆止饷芏确治觯孔榇笫笏机取~个断晕⒕凳右巴枷螅扑闫骄止饷芏饩当瓯镜闹票福菏裥募”瓯厩衅衅鲂募〗原染色。显微镜下观察心肌胶原分布。梯度脱水ァァ,丙酮梯度脱水ァァ%;费跏悄虿∈笮募∠赴呐嘌撼錾天体重狣系鼠唬骨蛔⑸淞措遄艟,琒公司用于实验。实验动物空腹状态下,测定血糖≥.疞,进行腹腔内注射%戊巴比妥新樽恚缓蟠蚩P厍唬谖蘧跫拢募∶庖咦橹旧ǎ河糜贑悦鸹钅谠葱悦浮U袅笏次。次。渭诱Q蜓G宸獗找海椅洗渭邮约罶妗次。显U捎孟晕⑼枷蠓治鲆疍疊进行干涞缇当瓯镜闹票福盒募”瓯居蔑八峁潭ǎ琍洗,酒精一配置:,室温次。琁℃·
敏度冷肷阆窕杉杉挠ü庵敌肟鄢募∠赴谖锤涸一暗谋尘坝ü庵怠Sü庑藕啪璏猣ㄓ猛枷袷莘治鋈件来处理。軬峁┑—分析软件进行图像处理:采用套锁的方式选取细胞的初始面积的比值来表示。接种于的一次性培养瓶中,每瓶细胞数要求达到~次培养基,取培养的单层细胞进行实验。甀/鹕四P偷闹票讣胺肿椋喝∑康赘哺怯械ゲ阈募∠赴呐嘌若干瓶分为四组:悄虿〉ゴ咳毖踝组谂嘌恐屑尤胗没旌:≤毕蚱恐谐淙牖旌系F灾没黄恐惺S嗟目掌闭瓶口密闭纬扇毖跄P汀8囱跗谠蚧挥没旌峡掌%空气ザ趸饱和的含%,其余方法同分发挥其药效作用蛊渲张ǘ任疞,复氧时应用的中亦含—危幼欧庞谂嘌渲蟹趸。将已负载一男募∠赴糜倒置荧光显微镜上检测,显微镜附带有热板,保持载物台℃。钙离子荧光的激发波长为,发射波长为。荧光图像由高灵疐狥。灰籉。胞时即可求得细胞的面积,各细胞的面积值则用测得的面积与缺氧前该细统计学处理:所有测试数据以硎尽>∠赴觯二氧化碳培养箱中培养タ掌ザ趸,每灰氮气サFザ趸饱和的台氏疭不含糖,并持续向瓶中通入低流量混合空气,达到疪损伤的目的。复氧观察期。毖酰囱跞ǔ谈┳—组谌毖跗组。囱跚案组狤组谌毖蹩J际辈挥枰┪锎理,而在缺氧末复氧开始前尤隕提前右┮员阋┪。囱跚案组狤组ǜ组募∠赴鸞及单细胞面积的测定:将心肌细胞置于含有的培养基浸染负载,。·甿/一
统软件,进行单因素方差分析。检验。以M臣蒲в邢灾圆笛樾蕴悄虿〈笫笮募〗涸芎孔苑⒉个月后就有明显的增加,尤其鲈伦樾募〗〕个月之后伴随猵,的表达而增加。但并不伴随,的表达减少而下降。减少而略有下降,但