文档介绍：浙江大学
博士学位论文
肿瘤表达谱基因芯片筛选胆囊癌肿瘤相关基因的研究
姓名:冯雪冬
申请学位级别:博士
专业:外科学(普通外科学)
指导教师:彭淑牖
20050401
中文摘要细胞凋亡相关的蛋白酰籇合成和修复、重组蛋白酰幌赴藕藕痛ǖ莸欣┰觯峁な邓』蛟诘野┲芯幸斐1泶铮牖蛐酒谋泶锴差异表达的序列。验证结果显示芯片筛查基因表达异常是可靠的。目的:使用肿瘤表达谱基因芯片筛查胆囊癌组织标本的异常表达基因。为胆囊癌临床诊断芯片的开发提供数据基础。并验证表达谱芯片筛查胆囊癌基因的可靠性;方法:收集孪实野┳橹瓯竞投杂Φ恼6哉兆橹臀吕涠潮4婧筇崛总直鸨昙怯ü馓秸牒笥牒龌虻腂型肿瘤表达谱芯片杂交。杂交后进行图像扫描和数掘分析。:共筛查出共同表达的异常基因条,涉及肿瘤发生发展的各个方面。其中表达下调的基因调,表达上调的基因条。其中:原癌基因和抑癌基因酰白条;代谢条:蛋白翻泽合成浩渌条。选取其中趸蚶胷畉况一致。结论:基因芯片技术能够低消耗、高灵敏度、高通量地分析细胞内基因的表达谱。通过大量的胆囊癌与胆囊正常组织之间差异表达基因的比较分析,发现了许多新的关键词:胆囊癌表达谱基因芯片适时定量陨覆榻峁醒证。博扛裎晰皿土学正学眈资助项日浙掳兹蛔手妫罕珥
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前言但因其发病隐匿,早期无特殊的症状和体征,发现时患者大部分出现阻塞性黄疸、全身情况差,或转移到其他脏器导致肿瘤无法切除等临床特点,总的五年生存率不达%~ァR虼耍岣叩ǖ乐琢龅脑缙谏下适悄壳罢镏蔚闹氐悖ǖ乐琢结石、胆囊腺瘤、慢性硬化性胆管炎和胆囊息肉是胆道肿瘤发病的密切相关因素。近年来肿瘤分子生物学的迅猛发展为胆道肿瘤的早期诊断带来了新的机遇与病。癌基因表达的增强或激活、抑癌基因表达的缺失或减弱及其突变,是胆道肿瘤要解决的问题,并具有重要的』腼床及社会意义。过去,对胆道肿瘤分子发病机理的研究,往往针对一个或几个基因,这主要是技术手段受限所致。近年基因芯片技术的出现,为大规模、高通量、快速研究胆如果把样品中的核酸片段进行标海谧ㄓ玫男酒亩烈巧暇涂梢约觳獾皆咏恍先利用表达谱芯片筛选胆囊癌相关基因组,并将表达谱芯片筛选出的相关基因,进胆囊癌在消化道肿瘤中约占第五到六位,占同期普通外科疾病的甀%、%,足ィ缙谡锒鲜腔竦昧己迷ず蟮墓丶S斜ǖ繧、期患者术后的晟媛士的早期诊断缺乏有效手段,也是目前诊断上的难点。目前认为,胰胆管合流异常、胆可能。与其它肿瘤相同,胆道肿瘤的发生、发展与多种基因异常有关,属多基因疾发生、发展的主要原因。因此,全面揭示胆道肿瘤基因水平的异常,对胆道肿瘤早期基因诊断,基因分型及肿瘤的分级、分期和其预后的判断起关键作用,是迫切需道肿瘤相关基因提供了手段和可能。基因芯片技术是一种建立在杂交测序基本理论上的全新技术,基因芯片是指按照预定位黄固定在固相载体上很小面积内的千万个核酸分子所组成的微点阵阵列。在一定条件下,载体上的核酸分子可以与来自样品的序列互补的核酸片段杂交。号。它的出现,使基因序列测定、基因功能测定等工作的程序得到了极大的简化,使许多原来根本不可能实现的检测成为可能。在此背景下,我们综合国内外现状,率行分类、生物信息学分析,选其外显子区┰觥⒉庑蛎魅吠槐淝榭觥NX⒎⒊胆囊癌相关芯片和基因突变检测芯片,提高胆道肿瘤的早期渗断水平,并为药物及基因治疗提供第一手信息和资料。博士毒蕾静宣晰豇土学正季宽资口顺憬Π讅;蛔式鸨唷痡┏
技术路线博士量蕾吾文瑶盗驰项澜∽匀蛔侍妆郩晰扛土学正謦蓖
第一部分肿瘤表达谱基因芯片筛选胆囊癌肿瘤相关基因的研究一、实验材料标记物和探索基因治疗的靶点,对提高诊断和资料胆囊癌有着非常的现实意义。依瓯竟苌媳昙遣±牛彰愿鞑橹ぁ基因芯片技术是九十年代仞发展起来的一门新兴的技术,它汇被广泛地应用于各神组织的表达谱分析.。这一技术的出现使得在一次实验中能够同时对成千上万条基因的表达进行检测,为同时检测生物体基因奖泶锏恼迕婷蔡供可能。胆囊癌是一种预后差、死亡率高的消化道恶性肿瘤。胆囊癌在消化道肿瘤中的发病率一般认为排在第五、六位】,全面了解胆囊发生癌变的过程中基因组的改变,筛查胆囊癌相关基因,将从分子水平理解胆囊癌的病因、寻找理想的胆囊癌据这种思路设计了用基因表达谱芯片筛查胆囊癌组织标本的实验。占轮月浙江大学医学院附属二院野┍瓯尽瓯镜牟杉捅4妫耸洹瓯厩谐螅蘧跫拢腥≈琢黾熬嘀琢以上正常胆囊做对照。ū瓯痉直鹱叭胛蘧橹苤校杆偻度氡阈旱9拗欣涠场2杉瓯虾笠。浔4妗博士量蕾语袁珥资助顺憬璊甫自然资《;晰皿土学正孽克
二、主要试剂三、