文档介绍：在诱导的肝癌细胞凋亡中作用的研究
硕士研究生王芳
指导教师李冰教授
专业名称外科学
摘要
目的是凋亡抑制蛋白家族成员
之一,常在肝癌细胞中呈现高表达,但其在肝癌进展中的作用尚未完全阐明。本
实验通过以全反式维甲酸,诱导肝癌细胞凋亡并抑
制细胞增殖,观察基因及其产物表达的变化,探讨在肝癌治疗中的
作用和在肝癌发展过程中所起到的影响,进一步证实以作为治疗
靶点的合理性。
方法用法筛选出不同作用浓度后,分别以含和
、的培养液孵育人肝癌细胞孵育天后,计数活细
胞,观察对肝癌细胞增殖的抑制情况通过倒置显微镜、微分干涉和电镜
联合判断细胞形态变化流式细胞仪检测不同浓度作用天后细胞凋亡和
细胞周期的变化方法测定在作用前后和不同作用
浓度下的变化情况通过和免疫细胞化学方法检测蛋白的表
达,观察对肝癌细胞蛋白表达的影响。
结果不同浓度的对人肝癌细胞的增殖均有抑制作用,并
有浓度和时间的依赖性在和对细胞作用
天后的抑制率分别为,随浓度的增加抑制作用增强经
作用后细胞形态上出现凋亡的变化作用天后细胞调亡比率
分别为高浓度组,低浓度组浓度越大诱导细胞凋亡的作用
越强经作用的细胞期细胞增多,期细胞减少,流
式细胞仪检测出凋亡峰结果显示作用组与对照组之间
细胞表达无显著性差异结果示细胞在
作用后蛋白表达下降,浓度越大作用越明显,在高浓度组
蛋白表达甚至几乎完全受抑制免疫细胞化学也表明蛋白表达下调且具有
剂量依赖性。
结论在人肝癌细胞株中高表达,能够在体外诱
导肝癌细胞凋亡并抑制肝癌细胞增殖,促进人肝癌细胞凋亡的
机制之一可能是通过调控基因产物的表达。
关键词肝细胞癌维甲酸凋亡增殖
叩
在诱导的肝癌细胞凋亡中作用的研究
硕士研究生
指导教师
专业名称
前言
原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,在我国肝癌的年死亡率仅次于
胃癌和食管癌,居第三位,但其发生发展机制尚未完全阐明。细胞凋亡和增殖的
异常在肝癌发生、发展中起着重要的作用。细胞凋亡是多细胞生物体维持自身稳
定的重要机制。随着分子生物学技术的发展,人们逐渐认识到选择性诱导肿瘤细
胞凋亡有可能改善肿瘤病人的预后。维甲酸是维生素类化
合物的一种代谢产物。近年研究发现,可诱导多种肿瘤细胞凋亡,但其诱导凋
亡的分子机制尚不清楚是一种凋亡抑制蛋白
,它几乎表达于所有人类常见肿瘤组织中,而在正常成年终末分化
组织中低表达甚至不表达。但对在肝癌细胞凋亡和增殖中作用的影
响及其机理尚不明了。
本实验通过和免疫细胞化学等方法观察全反式维甲酸
,诱导人肝癌细胞凋亡后表
达的变化,初步探讨诱导凋亡的机理和在肝癌发生发展中的作用。
材料
,研究对象
人肝癌细胞株中科院细胞库
全反式维甲酸美国公司
试剂
细胞培养
培养基美国公司
小牛血清中国医学科学院天津血液研究所
胰蛋白酶上海生工药业有限公司
哇蓝比色分析法
唾哇蓝美国公司
二甲基亚枫中国西安化学试剂厂
流式细胞仪检测
双染试剂盒美国公司
美国公司
子
美国公司
试剂盒日本公司
日本公司
蛋白提取
沈阳医药股份有限公司化玻公司分装厂
天津市塘沽化学试剂厂
北京化工厂
北京化学试剂公司
美国公司
兔抗人多克隆抗体美的羊抗兔药美国公司
美国公司
德国公司
膜美国公司
免疫细胞化学
兔抗人多克隆抗体美的羊抗兔北京中山生物技术有限公司
试剂盒及显色系统北京中山生物技术有限公司
仪器
超净台苏净集团安泰公司中国
二氧化碳培养箱
高压锅
电热鼓风箱湖北黄石医疗仪器厂中国
电热恒温干烤箱上海跃进医疗仪器厂中国
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超低温冰箱
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制冰机
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核酸测定仪
低压电泳仪汕头广播仪器厂中国
梯度仪
凝胶扫描成像系统
流式细胞仪
电镜
相差显微镜连庆中国
照相机珠江中国
显微镜
为
方法
细胞培养
用含小牛血清、青霉素和
链霉素的”培养基培养人肝癌细胞株,在
饱和湿度条件下培养生长,每天消化、传代一次。培养细胞呈单层贴
壁性生长。取对数生长期细胞用于实验。
试验唾哇蓝比色分析法
用二甲亚矾溶解,过滤除菌,贮存液浓度为。置
℃冰箱避光保存。实验时取部分药物以培养液稀释,分为
四个不同剂量组,阴性对照组加等剂量的,空白对照只加培养