文档介绍：原创性声明
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及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,
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研究所作的贡献均已在在论文中作了明确的说明。
日期:~ 年几”俨
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导师签年卫月三钾
本课题资助基金
教育部国家高等学校博士学科点基金
(批准号 33一20050533025 )
美国纽约中华医学基金会(c M B )基金
(项目号# 0 5一8 20 )
摘要
肝豆状核变性又称威尔逊病(W llson Di sease,W D ) ,是一种以
铜代谢障碍为特征的常染色体隐性遗传病。其分子病因为A T P 7B 基因
突变使其表达产物 P 型铜转运 A T P 酶功能缺陷而使胆汁中铜排泄减
少,导致肝、脑等组织中铜沉积而产生毒性损伤。临床表现为广泛的、
异质性的临床综合征,包括肝脏、神经、肾脏、角膜等多器官系统损
害。暴发性肝豆状核变性(F ul而 n an tW ilson D isease ,F W D ) 是 W D
的一种少见而严重的临床类型,病情凶险,预后极差,如不进行肝移
植治疗,病死率几乎为 100% 。其临床表现与其他原因引起的暴发性
肝衰竭类似,极易误诊,国内外至今尚未见从临床、病理和分子生物
学多个水平进行追踪观察的报道。
目的:
1、总结 F W D 患者的临床特点,探讨死亡原因和铜代谢指标的
变化规律, 为诊断和治疗提供科学依据。
2 、观察 F W D 患者的组织器官(特别是肝脏和肾脏) 病理特征,
进一步阐明发病机理, 为诊断和治疗提供科学依据。
3 . 分析 F W D 患者的分子生物学特点,检测基因突变,探讨分
子病理学机制,为基因诊断提供科学依据。
方法:
1、系统观察临床症状与体征,定期检查三大常规、肝肾功能、
铜蓝蛋白、尿铜、血清铜和影像学检查等; 用裂隙灯显微镜进行眼部
K 一F 环检查; 应用推荐的诊断标准进行诊断。
2 、通过尸体解剖或活体组织穿刺获取肝、肾、脑等重要器官组
织,进行显微和超微结构检查; 在特征性沉积颗粒上利用 X 一射线能
谱仪进行点的元素分析。
3 、采用 P C R 扩增后直接测序法,检测患者及家系成员 W D 基因
全长 21 个外显子及外显子/内含子交界区序列,进行在线序列分析。
结果:
1、两例患者均表现为铜蓝蛋白降低,24 小时尿铜显著升高,血
清游离铜极度升高; 一例患者 K 一F 环阳性,另一例未查,但肝铜显著
升高; 根据第八届 W D 国际研讨会提出的计分诊断标准,分别得 5分
和 7分,符合 W D 的诊断。既往无肝病史,起病 1月后出现严重肝功能
衰竭,有中度至重度溶血,符合F W D 的诊断。
2 、一例患者以肝病症状起病,一例以肾病症状起病,均于病后
1 个月进入肝衰竭末期后方确诊,失去了抢救的时机并死亡; 两例患
者病后均未及时治疗,病例二还使用了对肝脏有明显毒性的药物,是
引起肝衰竭的重要诱因; 两例患者均出现了感染、出血等多种严重并
发症,是死亡的直接原因。
3 、两例患者尿铜分别增加 67 至 252 倍,血清游离铜显著升高。
尿铜和血清游离铜显著升高对诊断 F W D 极有价值,也是判断病情轻
重和预后的重要指标。
4 、尸体解剖发现患者肝脏外观呈典型的结节性肝硬化,直接证
明至少部分 F W D 是在肝硬化基础发生的严重肝损伤。
5 、光镜下可见肝细胞大量变性、坏死,胞浆有大量颗粒沉积;
电镜下胞浆有许多细胞器碎片和颗粒状高电子密度沉积物,线粒体大
小、形态不一; 说明铜对肝脏的损害相当严重,与目前国内外文献报
道的基本吻合。肾、脑、肺、脾、胰腺、肠道、胆囊、心脏等器官组
织均有明显的病理改变,有褐色颗粒沉积,说明铜对全身多器官系统
均有严重损害。
6 、首次在超微病理检测的基础上,采用 X 一射线能谱仪对 F W D
肝脏组织进行了金属元素检测分析,直接证明肝细胞沉积的颗粒中含
有大量铜。首次直接证实肝脏细胞沉积的颗粒中含有大量铁,与近年
国外报道的 W D 患者存在铁代谢异常结论一致。
7 、采用 21 对引物