文档介绍：西南农业大学
硕士学位论文
牛卵母细胞冷冻保存的研究
姓名:包华琼
申请学位级别:硕士
专业:临床兽医学
指导教师:李跃民;王新庄

涠潮;ど捕耘B涯赶赴拘允的勖鳎核挠岳涠潮;ぜ粒憾谆ろ摘要、丙二醇、⒉芎在室添和培养湓度管法涠撑诼哑赴解冻缀体外成熟、体外受精后观察は赴蚜崖《解冻后荐培养、和,经体外受精分析卵袋率。冷冻后期卵母细胞的搴实验探讨了冷冻保护荆、冷冻方法、郛母缨麓发蠢除羧、冻藩悍ぐ椒ǖ儒魉序。遴过这一途径可望建立卵磷缯魏矛孛子霹,并为体乡芫ā⑴艘泼拭靥逵д湛怂硌究与应用提供实验材料。研究结果如下:条件下与牛期卵母细胞作用驯;ぞ:蠼刑逋獬墒炫嘌1砻鳎匿耱冷冻绦护裁在低浓疫室瀑条磐下鼹牛潮雾霉缨德毒瞧弱,翟隧浓爱毯加毒性增强:℃时毒性明显增加,其中毒性最弱。四种冷冻保护剂的毒性由强至弱是:7直鹛砣鐃./涠潮;ぜ、、、身ヰⅦ鸫坷涠撤ā㈧喙懿AТ靠、费款式越警法⒚П~表明:程序毒乏冷冻釉AТ坷涠车穆蚜崖史直鹞.%。=崂醣砣梗翰AТ坷涠承Ю跤庞诔搪镀涠常珿帮挠AЩ涠常珿方法冷冻效果与椒ㄏ嘟#琷“甚籊法冷冻麓、体辨壤粪、鞣⒂鹋赣ф酰卵裂率为.%,,目的在于筛选适合超低渝冷冻保存牛卵母细胞的冷冻程绦蚧涠撑诼涯副陌保珽蚉耘诼涯父侔谋;ろ馟效果要好~些。.%,二者差异不擞著牛抻母事戳崂球矗蟾携览搐毒
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文蘸综述涯赶赴涠潮4嬖缨藏爽球鑫举戆形成,这徉造液绥戆内藏浆呈遘冷状态,缁蕤蠹琵学势随着动物胚胎工程技术的彼俜⒄梗涯赶赴男枨罅考本缭黾印B涯赶赴涠潮存技术可究分利用各种动物卵母细胞资源,为体外受精、核移植、转基因动物生产等胚骀工程技术提供丰富两方便的树料来源,使这些离裁技术不受时闽、她域限制,缱对随缝迸露,获嚣为其走蠢实嗣纯、巍业凭发震开辞道鼹。舞霉绥蕊冷冻搽存还《与精予冷冻保存、聪胎冷冻保存一样建立种子库,为良种家裔、珍稀动物、濒热动物和任何个体的基因提供~种保种新途径。人类卵母细胞冷冻保存是辅助生育技术的照要组成部分,可满足不孕瘸人生育子女的要求,并且可克服冷冻人类胚胎引发的伦理道德和法律方面豹辍铡。慧之,襄母缨慈冷冻搽存霉为生穆王程窝嚣学疆究奠定基戳。连续报道了将小鼠胚胎在一胬涠潮4婊竦贸晒Γ掀起了胚胎冷冻的热潮。他在年又报道来自冷冻、解冻小鼠卵母细胞得到活仔。这激起研究者对人类、家畜、实验动物卵母细胞冷冻保存的大量研究,如人、马砝,;/.,;猿.,⒅籚.、山羊轮久髁停涣鹾>等等。其中以牛的研究最多,己获得牛体外成熟卵,:,臀闯墒炻6浚驳玫搅死涠辰舛橙肼涯赶疙熬逯帐芫ḿ际醴⒂錾牧。舞母缀魏冷冻保存方法主要像签于释齄冷冻缳存方法,其冷冻弱郛母缨胞熬冷冻保存是采取特殊豹保护措施翻黪湛程序,,瑟秀温后又能後篾谯谢§惨皇臀菲诒4媾赶覆匕旯牧恪冷冻过稷对细胞的影响细胞的冷冻保存实质上是一个脱水的过程。,随着冰晶逐渐生长,细胞外液的渗透压增加。由于冰晶不能透过细胞膜,比胞外高,细胞水份由高忧学势流向低化学势。如聚细胞降温冷却足够慢,大量水分从胞内流向胞外,降低细胞膜内外化学势差,细胞进行性脱水,细胞内就不会形成冰晶,但细胞内溶质浓度升高。如果绷胞冷却过快,细胞内水分来不及流出,达不到细胞内外藏,⑴蔽,原理相似。牛卵母细胞玲哺梅毒曲研宪.,:.,
化学势平餐,鲴藿氅肉结冰,@涠彻讨校珥谕虮贡懿唤避免静,关键是冰晶瓣大小。只要不形成对纲腿造戏物理性伤害麴大狄晶,短维持在微鑫状态,缨骢将不会受到损伤豕庾さ龋。岢隼涠乘伤的两因素假说,一怒细胞内冰晶的形成,这是冷却速率过快造成的,由于水分来不及渗如,细胞内大凝冰晶形成,对细胞造成致死性损伤;二是溶液效应,这是冷却过慢引起的,它使细胞暴露在高浓度溶液的时间过长而遭损伤。解冻过程对细胞的影