文档介绍：内蒙古大学
硕士学位论文
SMYD3在牛卵母细胞体外成熟过程中表达及功能的研究
姓名:李燕
申请学位级别:硕士
专业:动物学
指导教师:于海泉
20090601
谂C赶赴逋獬墒旃讨斜泶锛肮δ艿难芯摘要是组蛋白位赖氨酸二甲基化、三甲基化/特异性转移酶,具有执行甲基转移酶活性的峁褂蚝筒斡氲鞍谆プ鳌⑹侗鹛匾霥序列的锌指基序。通过结合靶基因启动子区序列催化形成钚宰B急曛荆鹘谄湎掠一系列基因的激活和表达,其中包括端粒酶逆转录酶等。牛卵母细胞体外成熟过程中一直维持奘巫刺D壳爸环⑾至街痔匾煨源呋疕的酶蚆。辉诹叫陨诚赴跏至亚案粗破诘酱窒咂诠程中表达,粗线期后不再表达,说明粗线期后有其他特异性甲基转移酶维持奘巫刺渲校琒可能在这一过程中起重要作用。淖饔没碓诎┫赴幸驯还惴貉芯浚诼涯赶赴墒臁⑹芫及早期胚胎发育过程中的研究还很有限。本实验首先对牛卵母细胞体外成熟过程中虻膍偷鞍字仕降亩浠辛搜芯浚煌闭攵上游、中游、下游设计抑制位点专一性的短干扰瑂耘谌タ帕O赴涯赶赴辛:献⑸洌芯在成熟过程中干扰表达对牛卵母细胞成熟、受精及早期胚胎发育的影响;并对体外受精暮献咏凶⑸洌芯渴芫ê蟾扇臩表达对早期胚胎发育的影响。.李燕谂B涯赶赴逋獬墒旃讨斜泶锛肮δ艿难芯
表明:诖ィ甌诖罅糠氲鞍撞⒌組期蛋白量持续上升,,可能对维持后期蜃B技せ⑴B涯赶赴墒旃讨蠸基因和蛋白质的动态变化在本研究建立的体外培养系统中,、、、直鹩%、.%、.ケ壤穆涯赶赴τ贕凇期、期、.期、凇8菀陨鲜荩捎、逋馀嘌奔渥魑J占τ减数分裂期、凇凇甌凇期的卵母细胞的依据。用荧光实时定量觳釹在牛卵母细胞体外成熟过程中表达的结果显示:牛在牛卵母细胞减数分裂各时期持续表达,相对于期,表达水平在期、.,。,蛋白信号的形成起关键作用。在表达的研究中,检测到一个未见报道的B急尽测序结果与基因组蛄斜榷裕⑾指米B急疚挥诖嘶号内含子序列.,符合真核生物臣艚臃绞剑部勺魑M庀宰咏转录。进一步研究显示来自不同个体的卵母细胞或来自同一个体的不同组织肝脏、肺脏、睾丸、脾脏及心脏都存在相同的转录本,表明酥挚杀浼艚无个体和组织特异性。⒏扇臩表达对牛卵母细胞成熟、受精及早期胚胎发育的影响本实验针对牛的第、、—区域分别设计缮嫘蛄校瘟:隙訥谌タ帕O赴穆懵呀邢晕⒆⑸洌内蒙古大学硕士学位论文
养的表达量与对照组相比下降到ィ扇判氏灾期去颗粒细胞的裸卵注射畇研究结果表明:畇注射组与阴性对誑.⑸渥无义干扰片段墒炻饰尴灾钜.%.%,,说明干扰的表达不影响卵母细胞的成熟。非注射对照组卵丘卵母细胞复合体,虶谌タ帕细胞裸卵珼某墒炻饰尴灾钜.%畂,说明期机械去除颗粒细胞不影响卵母细胞成熟;但注射组与非注射组体外成熟率差异极显著ァ.%、.%,,可能是由于显微注射操作过程中的机械损伤造成。期进行胞质注射畇实验组、注射畇阴性对照组及非注射组对照组、髯槁涯赶赴逋獬墒炫嘌蠼刑逋馐芫ā结果显示:畇注射组、椤.⑸渥橹渎蚜崖示显著差异.%,;但畇注射组的细胞率、囊胚率显著低于椤—⑸渥ァ.%,,表明期去颗粒细胞裸卵注射畇不影响卵母细胞的受精和卵裂,但显著降低赴屎湍遗呗剩赡苁且蛭せ盍四承┰谂咛ビ细胞到囊胚发育过程中起重要作用的基因。而隢.⑸渥榈细胞率、⒆⑸涞幕邓鹕硕允笛榻峁挥杏跋臁A外,与.⑸渥椤.⑸渥榈穆蚜崖省细胞率、囊胚率差异均极显著.%、ァ%,,说明颗粒细骃.%,..%、.%;.%,.%.ァァィァァ.%;.%李燕谖缏涯赶赴逋獬墒旃讨斜泶锛肮δ艿难芯.
胞对卵母细胞的体外受精过程有重要作用。此外,本研究对经体外成熟并受精蟮暮献咏蠸.⑸涫验,结果表明:畇注射组与对照组非注射受精卵、畇注射组的卵裂率、赴省⒛遗呗示尴灾钜.%.⒂幕懿皇窃谑芫ê蠼⒌摹综上所述,期去颗粒细胞裸卵干扰表达后不影响牛卵母细胞体外成熟、受精及卵裂,但严重降低赴咛サ侥遗叩姆⒂芫ê俑扇藕献拥腟表达对卵裂、赴细胞及囊胚的发育都没有影响。由此说明,üせ钅承┰谂咛ゴ细胞到囊胚正常发育中起重要作用的基因来调节发育,并且这种影响是在卵母细胞成熟晚期而非受精后建立的。本研究为诼涯赶赴墒臁⑹芫ḿ芭咛サ姆⒂讨械鹘诨淼难究提供了一定的基础。关键词:杀浼艚樱咛シ⒂琑干涉.%.%;ィ内蒙古大学硕士学位论文
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