DNA的定量测定二.ppt

文档介绍：实验十一 DNA的定量测定-二苯胺法
一、原理
DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成-羟基-a-酮基戊糖，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物，在一定波长范围内，化合物蓝色的深浅与DNA的含量成比例关系，可用比色法测定。
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二、实验仪器
试管
移液管
7220分光光度计
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三、实验试剂
1、DNA标准液（200ug/ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。
2、二苯胺试剂：
A液：，溶于100ml冰乙酸，。贮于棕色瓶中。
B液：，临用时配制
临用时，
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四、试验步骤

取干燥的试管6支，编号，按下表加入试剂：
加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，以吸光度对DNA浓度作标准曲线。
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吸取DNA样液1ml，, 加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。
五、结果计算
按下式计算样品中DNA百分含量：
DNA%=样液中测的DNA量/样液中所含样品量*100%
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