文档介绍：为探讨复合疫苗的可行性,将人工合成的具有良好免疫特
异性的多表位杭原基因与基因连接成基因,与日一半乳糖甘
酶基因融合后,在大肠杆菌中高效表达。旬的蛋白可被
扰及杭抗体所特异识别。扰原皮下注封免疫小鼠后,
诱发了较高水平的杭一反应。且用灭活减毒鼠伤寒沙门氏菌作
为佐剂时,可促进小鼠十细胞增殖
活菌苗口服免疫小鼠后,于第周开始诱发特
异性免疫应答,至第周其滴度与蛋白质抗原相似。同时诱发了高水平的
细胞增殖反应。所有免疫小鼠均未见明显的毒副作用。
将基因与基因连接成基因,克隆于乳酸菌表达
载体中,在嗜酸乳杆菌中获得表达。构建的重组嗜酸乳杆
菌口服免疫小鼠后,于第周可检测到低水平的
抗和抗一,以前者的滴度高些。小鼠外周血
细胞出现增殖反应。
本研究提示,复合杭原可诱发特异性体液免疫及细胞免疫应
答,减毒鼠伤寒沙门氏菌及乳酸杆菌口服活菌苗具有潜在重要的应用价值,
为双价疫苗研究提供一定的理论及实验依据。
关健词丙型肝炎病毒, 乙型肝炎病毒, 及苗, 口服,
免疫应答, 鼠伤寒沙门氏菌, 嗜酸乳杆菌
刚

刚
药物、毒素、病毒等都可诱发肝脏的炎症反应,其中病毒是肝炎
的最常见病因病毒性肝炎是世界上流行久
远、广泛、危害极大的传染病之一,以亚洲、非洲、拉丁美洲等一些发展中
国家的流行率较高。
年,等发现急性黄色肝姜缩可能由病毒引起,从而确认
了病毒是肝炎的致病因素之一,随后大量研究也证实了这一点尽管对病毒
性肝炎病原体的研究已近一个世纪,但直到近年多来,随着分子生物学、
分子免疫学、细胞生物学等学科的建立及发展,该领域研究才获得重大进展。
根据扦炎病毒的生物学特性、临床特点及流行规律等,目前已确定的肝炎包
括甲、乙、丙、丁、戊、庚等六型肝炎,其中以乙型肝炎和丙型肝炎的发病
率最高,自然转阴率低,治疗效果差,病程迁延,且与肝硬化、肝癌等的发
生及发展显著相关,因此一直是人类希望重点攻克的疾病之一。
一、丙型肝炎病毒
年,经血传播的非甲非乙型肝炎被确定为丙型肝炎
,它的病原体为丙型肝炎病毒随后,有关
丙型肝炎的病理、诊断、治疗、预防以及丙型肝炎病毒的分子生物学等方面
的研究迅速开展起来,取得了一系列突飞猛进的进展。
丙型肝炎主要经输血、静脉注射降品、手术等胃肠外途径传播,另有
一些散发型传播途径,如家庭成员长对密切接触、性接触、母婴垂直传播等,
但可能性都较小。约有的病例呈慢性化,且容易发生肝硬化,与肝
癌的发生关系密切,目前虽可用日进行治疗,但效果并不理
想,副作用大,易复发,而且感染后免疫保护作用差,尚无有效的疫苗
可用。
为单股正链病毒,约由组成,年首次由美国
公司的等获得了部分基因片段。根据核普酸序列分析,与
瘟病毒、黄病毒在某些对应区域具有较高的同源性,但与瘟病毒在进化
上比黄病毒更接近,这种病毒归属于黄病毒科中的个不同属‘,。
与疽病毒和黄病毒相似,的基因组含有一个几乎跨越整个基因组的
单一开放阅读框,编码出一个一
组成的多聚蛋白前体,在宿主与病毒编码的蛋白酶的作用下,被加工成各种
结构和非结构蛋白质。
基因组如图所示。
一结构蛋白一非结构蛋白
一
丁一一「一一下。·
一十明’
一—门

非编码区包膜枪蛋白螺旋醉、丝氮酸蛋白酶
核衣壳蛋白醉多聚游
的基因组略图
‘端非编码区由大约一组成,含有
或个负链,能编码最大为的肤在所有分离株中都
高度保守,与疽病毒的相应区段高度同源,可能在病毒复制或翻译过程中发
挥很重要的调节作用,因为中有一内部核糖体进入位点
。
在下游是三个结构蛋白基因,分别编码的核心蛋白
和的包膜蛋白和
和的端有较为明显的糖基化修饰。这些蛋白上有细胞和细胞表
位,与的慢性化有一定关系
非结构蛋白约为,变异性较大,疏水性很强,与细胞膜相伴
随,其功能尚不清楚,但也有人认为是蛋白酶相对分子质量
含有与三磷酸核普结合的、在复制中参与基因组解旋的螺旋酶和参与多
蛋白前体中蛋白加工的丝氨酸蛋白酶编码的蛋白质,含
有抗原序列,已被克隆表达并用于丙型肝炎的诊断。此蛋白疏水,
可能与膜结合,但功能还不清楚‘编码的蛋白质有多种功能,
含有复制基因组的依赖性聚合酶。
下游的区有一,带有尾,对结构的
维持、稳定性及病毒蛋白翻译过程起着重要作用‘川。
与不同,病毒株极易变异,已在世界各地发现了数十株全
基因组序列和更多的克隆片段。核酸和蛋白序列高度易变,核
酸序列的同源性仅一,因此有许多不同的型和亚型
一般认为如果不同病毒株之间核普酸序列的同源