文档介绍：专学位申请人答辩委员会主席姚开泰教授钟雪云教授李黄冰副教授广州鼻咽癌细胞系蠸侨旱募觳饧捌渖镅Чδ艿姆治课题来源:自选名称指导教师答辩委员会成员病理学焦锋曾木圣教授罗深秋教授欣教授论文评阅人顾为望教授陈系古教授业南方医科大学级硕士学位论文
鼻咽癌细胞系蠸侨旱募觳饧捌渖物学功能分析硕士研究生:焦锋指导教师:姚开泰教授摘要似的特性——自我更新的能力和多向分化的潜能,是肿瘤增殖生长、转移和复背景:肿瘤干细胞学说认为肿瘤组织中存在极少量肿瘤细胞,具有正常干细胞相发的根源。什么是肿瘤干细胞壳叭衔V琢龈上赴哂腥缦录父鎏氐悖肿瘤组织中的极少量肿瘤细胞,具有强大的致瘤,转移和耐药能力。尴薜自我更新能力,肿瘤干细胞能够产生与上一代完伞相同的子代细胞。只力,肿瘤干细胞除了自我更新之外,还能够产生不同表型的肿瘤细胞,能够在体内形成新的肿瘤。哂杏敕侵铝鱿赴不同的表面标志。现今,人们已成功的从急性髓性白血病,多发性骨髓瘤,乳腺癌,脑肿瘤,非小细胞肺癌,黑色素瘤,前列腺痛和膀胱癌等多种类型的肿瘤患者组织中分离并培养出各自的肿瘤干细胞。这证明在肿瘤细胞群体中确实存在一类极少数的能使群体扩增的肿瘤干细胞。肿瘤干细胞现已成为肿瘤研究的热点。目前,主要依据肿瘤细胞表面膜蛋白,粘附分子及受体的差异,通过一些假想的干细胞表面标记,如确掷牒图ㄖ琢龈上赴5怯捎诖蟛糠值闹瘤尚缺乏特异性的表面标记,因此肿瘤干细胞的分离纯化一直是长久以来亟待解决的难题之一。,赴魑R恢植煌ü罢姨匾煨缘谋砻姹昙牵利用荧光染料外排的特性来富集肿瘤干细胞,作为研究肿瘤干细胞的方法是一种理想的途径。细胞是指可将荧光染料泵出细胞外,在一步法骨硕士学位论文而侧群
髓造血干细胞分选时分离出的弱荧光信号细胞群。这群细胞在总量上只占整个骨髓细胞的ィ锤缓煅V亟ㄏ赴丛煅8上赴赴忠丫多种正常组织被发现,如人和小鼠的骨髓、骨骼肌、神经系统等。此外,实体肿瘤标本以及肿瘤细胞系,如胃癌,前列腺癌,肺癌,胶质母细胞瘤等都可检测分离出细胞。但是在觥⒑嵛萍∪饬觥⒐侨饬觥⒏瓮聪赴闔和巾却没发现。研究表明,细胞具有自我更新,多向分化潜能和修复组织的功能,肿瘤细胞株中的细胞还具有强大的致瘤能力和耐药能力,可能是肿瘤复发和耐药的根源。细胞高表达T说鞍産家族成员疊,并大多同时表达有相应干细胞的标记分子。疊定位于细胞膜,具有“泵”的功能,因此细胞可将许多细胞毒化疗药物排出细胞外,从而使肿瘤对化疗药物产生耐药性。通过转基因技术增/.谋泶锟梢允筍棵飨栽黾印=又置庖咚毕萜废的疭蠛笙允荆琒赴哂屑康某闪瞿芰ΑD壳袄此担谌狈ο灾干细胞分子标记的情况下,细胞可作为研究肿瘤干细胞的一种重要途径。本课题利用实验室现有的的流式细胞仪,检测鼻咽痛细胞系中是否存在细胞亚群绱嬖冢琒胍恍└上赴砻姹昙俏镏涞南嗷ス叵担并在体内外鉴定其生物学功能,分析其是否具有肿瘤干细胞的特性,并在临床标本中得到进一步验证。建立一个检测和分离鼻咽癌干细胞的方法和平台,为继续深入探讨鼻咽癌的病因、发生发展以及转移、复发、耐药等奠定基础。方法:,利用流式细胞仪和倒置荧光显微镜共同分析,探讨获得细胞所需荧光染料孵育的最佳时间和最合适的终浓度。研究细胞生长密度,孵育环境对细胞比例的影响。,分析细胞与各表面中文摘要痓
,流式细胞仪分析几者之间的关系。,倒置荧光显微镜和流式细胞仪对所分选的细胞进行纯度鉴定。觳釹赴蠥转运蛋白家族,干性相关等基因的表达流式细胞仪分选出和细胞,抽提芙杭≧的纯度和浓度,选取质量好的琿检测相关基因的表达。ü桨蹇寺⌒纬墒匝椋琈检测生长曲线法比较和细胞体外的自我更新与自我增殖能力。同时,觳獗冉蟂蚆赴鸵┠芰Α只蹦艿牟舛ǎ悍盅〕鯯蚆赴逋馀嘌问奔浜螅匦翲荧光染料染色,流式细胞仪分析细胞亚群比例的变化。瓸∈仪窒匝榧癟体外迁移试验分析细胞亚群的侵袭和转移能力。魇较赴欠治鯯蚆赴南赴芷凇闶筇迥诔闪鍪笛椋翰煌康腟蚆赴荻×××和个皮下种植裸鼠,后观察成瘤率。瘤组织染色,üü。硕士学位论文四..果。结果:
煌赴又置芏扔跋霺赴谋壤不同的细胞密度或者细胞融合度会影响细胞的比例。在一定的程度上,细胞的接种密度降低,其侧群细胞的比例也会相应的随之降低。%。其都可以被种啤煌跤肪秤跋霺赴谋壤℃恒温孵箱中较之恒温水浴箱中,细胞比例明显增高。可能孵箱中孵育导致染色不完全。,