文档介绍：实验四 阻断酶联免疫吸附试验 （阻断ELISA)
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免疫标记技术
定义：
将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。
分类：
放射免疫测定法：131I，32P
免疫荧光技术：FITC，PE
免疫酶测定法：HRP，AP
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免疫酶测定法 (Enzyme ImmunoAssay,EIA)
用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。
辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP)
特点：
高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性
高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，p***平微量检测
定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值
分类：
酶联免疫吸附试验：可溶性抗原或抗体
酶免疫组化法： 组织中或细胞表面的抗原。
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酶联免疫吸附试验 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)
用酶标记抗原或抗体检测液体（血液、细胞液）中未知抗体或抗原的方法。
（1）利用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接。
（2）通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。
测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
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直接法（direct ELISA）：
将已知抗原直接吸附于载体，加酶标抗体
检测抗体
间接法（Indirect ELISA）：
将已知抗原吸附于固相载体，加酶标记二抗
检测液相中未知抗体
双抗体夹心法（Sandwich ELISA)：
将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗
检测液相中的可溶性抗原
竞争法（Competitive ELISA) ：
将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体
检测液相中的可溶性抗原或抗体
阻断法（Block ELISA) ：
将已知抗原吸附于固相载体，酶标记单克隆抗体
检测液相中的可溶性抗体
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（1）  直接法测定抗原
A.      将抗原吸附在载体表面；
B.      加酶标抗体，形成抗原—抗体复合物；
C. 加底物。底物的降解量＝抗原量。
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（2）间接法测定抗体
A.      将抗原吸附于固相载体表面；
B.      加抗体, 形成抗原-抗体复合物;
C.      加酶标抗体；
D. 加底物。测定底物的降解量＝抗体量。
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（3）双抗体夹心法测定抗原
A.      将抗体吸附于固相表面;
B.      加待检抗原，形成抗原-抗体复合物;
C.     加酶标抗体;
E. 加底物。底物的降解量＝抗原量。
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（4）竞争法测定抗原
A.     将抗体吸附在固相载体表面;
B. 同时加入酶标抗原和待测抗原，竞争结合抗体； 对照只加入酶标抗原；
C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知抗原量。
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（5）阻断法测定抗体
本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。
A. 将抗原吸附在固相载体表面;
（抗体）, 形成抗原-抗体复合物;
C.  再加酶标单抗；
D. 加底物。
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