实验四_酶联免疫吸附试验_ELISA.ppt

文档介绍：实验四阻断酶联免疫吸附试验(阻断ELISA):将抗原-抗体反应与标记技术相结合,用放射性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原,通过检测标记物,间接测定未知的抗原或抗体。:?放射免疫测定法:131I,32P?免疫荧光技术:FITC,PE?免疫酶测定法:HRP,AP免疫酶测定法((EEnzyme nzyme IImmunommunoAAssay,EIAssay,EIA))??用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。––辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶(HRP)(HRP),碱性磷酸酶,碱性磷酸酶(AP)(AP)??特点:特点:??高度特异性:保持抗原抗体反应的特异性高度特异性:保持抗原抗体反应的特异性??高灵敏度:酶催化底物显色的高效性,高灵敏度:酶催化底物显色的高效性,pgp***平微量检测水平微量检测??定性定量检测:反应液颜色深浅或光密度值定性定量检测:反应液颜色深浅或光密度值??分类:分类:??酶联免疫吸附试验:可溶性抗原或抗体酶联免疫吸附试验:可溶性抗原或抗体??酶免疫组化法:酶免疫组化法:组织中或细胞表面的抗原。组织中或细胞表面的抗原。酶联免疫吸附试验((EEnzyme-nzyme-LLinked inked IImmunommunoSSorbentorbentAAssay, ELISA)ssay, ELISA)用酶标记抗原或抗体检测液体(血液、细胞液)中未知抗体或抗原的方法。(1)利用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接。(2)通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。–测定的对象可以是抗体也可以是抗原。??直接法(直接法(direct ELISAdirect ELISA):):?将已知抗原直接吸附于载体,加酶标抗体?检测抗体??间接法(间接法(Indirect ELISAIndirect ELISA):):?将已知抗原吸附于固相载体,加酶标记二抗?检测液相中未知抗体??双抗体夹心法(双抗体夹心法(Sandwich ELISA)Sandwich ELISA)::?将已知抗体吸附于固相载体,酶标记一抗?检测液相中的可溶性抗原??竞争法(petitive ELISA) Competitive ELISA) ::?将已知抗体或抗原吸附于固相载体,酶标记抗原或抗体?检测液相中的可溶性抗原或抗体??阻断法(阻断法(Block ELISA) Block ELISA) ::?将已知抗原吸附于固相载体,酶标记单克隆抗体?检测液相中的可溶性抗体((11));将抗原吸附在载体表面;,形成抗原加酶标抗体,形成抗原——抗体复合物;抗体复合物;C. C. 加底物。底物的降解量=抗原量。加底物。底物的降解量=抗原量。((22)间接法测定);吸附于固相载体表面;, , 形成抗原形成抗原--抗体复合物抗体复合物; ; ;加酶标抗体;D. D. 加底物。测定底物的降解量=抗体量。加底物。测定底物的降解量=抗体量。((33)); ; ,形成抗原加待检抗原,形成抗原--抗体复合物抗体复合物; ; ; ; E. E. 加底物。底物的降解量=抗原量。加底物。底物的降解量=抗原量。((44)竞争法测定抗原); ; B. B. 同时加入酶标抗原和待测抗原,竞争结合抗体;同时加入酶标抗原和待测抗原,竞争结合抗体;对照只加入酶标抗对照只加入酶标抗原;原;C. C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知抗原量。加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知抗原量。((55)阻断法测定抗体)阻断法测定抗体本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎(猪传染性胃肠炎(TGETGE)、猪伪狂犬病()、猪伪狂犬病(PRPR)及猪)及猪胸膜肺炎(胸膜肺炎(APAP)的主要检测方法。)的主要检测方法。; ; (抗体)先加待检血清(抗体), , 形成抗原形成抗原--抗体复合物抗体复合物; ; ;再加酶标单抗;D. D. 加底物。加底物。