文档介绍：办公地点：生物楼117；电话：；
Email:
现代微生物学实验技术
1
实 验 内 容
♣ 染色体步移法克隆已知序列的侧翼序列
♣ 转座子随机突变及目的表型的筛选
♣ 大肠杆菌β-半乳糖苷酶的诱导
♣ 利用SDS-PAGE分析融合蛋白的可溶性
♣ 绿色糖单胞菌的发酵及孢外酶的提取
2
利用SDS-PAGE分析融合蛋白的可溶性
牛伯庆 王子元
3
实验目的
了解利用基因工程技术在大肠杆菌中表达外源蛋白的原理；
掌握SDS-PAGE的原理、实验操作过程及重要性。
4
基因的基本结构
ORF：Opening Reading Frame
启动子
终止子
转录区
基 因
RNA起始点
ATG
TGA
核糖体结合位点
实验原理
5
影响基因表达的因素：
启动子： 控制基因表达的第一步，是高表达的关键；
结构基因：密码子偏好性；
表达载体的拷贝数：商业化，pET系列、pGEX系列等。
实验原理
6
目的基因：
受噬菌体T7强转录、
翻译及终止信号控制；
Lac操纵子；
T7 RNA聚合酶启动；
IPTG诱导；
有His-tag标签；
大肠杆菌BL21，
实验原理
7
8
操纵基因
结构基因
调节基因
启动子
阻遏物
ß-半乳糖苷酶
透性酶
乙酰基转移酶
乳糖操纵子
9
切
接
转
增
筛
表达
10