文档介绍：南方医科大学
硕士学位论文
间充质干细胞联合骨髓细胞输注诱导胰岛移植免疫耐受的研究
姓名:李明
申请学位级别:硕士
专业:内分泌与代谢病学
指导教师:蔡德鸿
20080415
问充质干细胞联合骨髓细胞输注诱导胰岛移植免疫耐受的研究硕士研究生:李明指导教师:蔡德鸿教授摘要研究背景胰岛移植重建胰岛素分泌系统,是一种有望彻底根治糖尿病的治疗方法。年,方案的成功,标志着胰岛移植取得了突破性的进展,从而带由于移植免疫耐受的机制十分复杂,尽管诱导免疫耐受的方法众多,但均未能达到完全可靠持久的特异性耐受。持久耐受状态的诱导需要稳定混合嵌合状态的长期维持,是在移植受体内供体来源的细胞和受体细胞的共存。在啮齿类动物体内通常通过中枢删除机制达到混合嵌合状态,使能够维持长期的器官移植免疫耐受。然而传统的骨髓细胞输注仍然无法在人体内实现有效的混合嵌合状态,且非特异性免疫抑制剂的应用,移植物功能的慢性丧失以及潜在致命性的移植物抗宿主反应的发生,这些因素均限制着通过骨髓细胞嵌合体来达到器官织、胎盘、头皮和多种胎儿组织中获得,具有向骨组织、软骨和脂肪等的多能分化潜能。在体外实验中还发现谔囟ǖ呐嘌跫履芄幌蚣∪狻⒏蜗赴内皮细胞和神经组织等分化,骨髓间充质干细胞体外培养条件下还可以转分化为胰岛素阳性细胞。谛募∷鹕说男薷矗谴晃陕液投嘀执恍约膊≈硕士学位论文动了胰岛移植临床试验性治疗在世界范围内广泛展开。目前普遍认为,解决异体移植排斥反应的关键在于诱导受体对供体的细胞、组织或器官产生免疫耐受。移植耐受的临床的应用。间充质干细胞琈梢源映墒斓墓撬琛⒅咀
目的方法显示出很好的疗效。近年来发现间充质干细胞还具有逃脱免疫识别和抑制免疫反应的特性。通过阻断共刺激通路诱导耐受和延长胰岛移植物的存活亦受到广泛关注,抗タ寺】固逶谟盏蓟旌锨逗咸逯蟹⒒幼胖匾5淖饔谩K芄有效的抑制活化的赴螩浠谋泶锊⑶易柚购涂乖岢氏赴泶受体的结合,阻止纳系鱉的作用,减少共刺激分子和细胞因子的表达。传统的骨髓细胞移植做为诱导混合嵌合体和胰岛移植耐受的手段的应用已多年,并且成为最稳定的成功措施。但是要获得满意的临床疗效又面临着许多困难,诸如预处理的毒性、移植物抗宿主病和免疫低下等。由于菀状庸撬枥锓掷牒屠┰觯⒕哂刑油衙庖呤侗鸷鸵种泼庖叻从的特性,所以我们拟应用糖尿病小鼠模型进行同种异体胰岛移植,抗为对受体预处理措施,并同时输注间充质干细胞和骨髓细胞,观察其对同种异体小鼠胰岛移植诱导混合嵌合状态,及对胰岛移植物存活时间的影响。观察:瞎撬柘赴渥⒍酝忠焯逍∈笠鹊阂浦灿盏蓟旌锨逗献刺及对胰岛移植物存活时间的影响,为寻找诱导胰岛移植免疫耐受的方法开辟新分离培养、扩增分别取小鼠和小鼠颈椎脱臼处死,用狣嘌逑闯龉晒悄诘墓撬瑁状换液后每换液,依据贴壁培养法分离和扩增〉代细胞作为移植供源,调整细胞数⒐┨骞撬柘赴票溉〕鯟/∈笏ú喙晒牵门嘌撼宄龉撬柘胞,通过坎恍飧稚竿耍占蠹尤牒煜赴呀庖喝コ煜赴胄去上清,再洗涤两次用培养基重悬细胞调整/备用。⑿∈筇悄虿∧P偷慕⒑鸵鹊阂浦睸/骨灰淮涡宰射/∈螅票甘笛樾蕴悄虿∧,注入肾包囊下约胰岛。移植中文摘要的途径、提供新的依据。痬
结果后苊刻旒嗖馑婊L牵院蟾羧詹次血糖,,以第问奔淙衔E懦夥从Ψ⑸⑿∈笠鹊合赴姆掷氪炕摘取籆/∈蟮囊认伲针对胰腺反复多点注射胶原酶缶仓瓜;采用自制的推进式离心管,以单一密度梯度液./炕认傧铮螂甓胰岛进行特异性染色,利用胰岛素释放试验检测胰岛细胞的功能;纯化后的胰⑹笛榉肿楹痛斫幌礐/∈和/∈分别为供体和受体,无关第三品系小鼠。椋憾哉兆单纯进行胰岛移植籅组:供体渥ⅲ籆组:供体骨髓细胞输注;椋汗┨骞撬柘赴渥ⅲ籈组:供体骨髓细胞和第三品系的小鼠渥ⅰC孔楦只,均在胰岛移植术后经小鼠尾静脉输注上述细胞悬液。所有受体小鼠在胰岛⒐┨逑赴逗下始觳庖浦埠蟮牡、、矍虿裳肝素抗凝后,加入红细胞裂解液裂解红细胞,离心移去上清。,充分混匀后置姹浔芄馊旧,吹次,加匦傻ハ赴海魇较赴羌觳狻9娑ǖ鼻逗下实陀%时表⒍曰旌狭馨拖赴从Φ挠跋彀瓷鲜鯝、各组的分组和处理措施进行胰岛移植,糖尿病/∈蠓直鹩谝鹊阂浦彩鹾、、∑⒃喾离淋巴细胞,与处理的供体小鼠淋巴细胞进行单向混合淋巴细胞培养,ü鄄焓芴辶馨拖赴鲋撤从Α生长情况原代培养灰海杉倭刻谙赴翁还嬖颉T代及传代培养的小鼠喑仕笮危糠殖什还嬖蜓杉隙嗉湫纬伞E嘌至第南赴氏址拇感巍⑿切渭安还嬖蛐蔚榷嘀中翁赴史岣唬巳拭飨裕硕士学位论文岛移植到实验性糖尿病/∈蟮纳霭蚁拢鹾蠊鄄炱溲L潜浠移植的同时腹腔注射笴单抗。入示混合嵌合状态的结束。细胞平行排列或漩涡状生长。
结论⒋炕ヒ幻芏忍荻纫捍炕螅部傻玫胰岛,平均纯度为%。./,崾