文档介绍：华中科技大学
硕士学位论文
肝豆状核变性疾病的基因分析及基因诊断的研究
姓名:王平
申请学位级别:硕士
专业:临床检验学
指导教师:吴健民
20070501
华中科技大学硕士学位论文
第一部分
和基因与肝豆状核变性疾病
临床表型相关性的研究

摘要
目的检测 MD1基因,探讨2个基因
在WD致病和患者临床表现多样性中所起的作用。方法 PCR法选择性扩增ATP7B基
因的突变热区;MD1基因的3个外显子包括和内含子的交界区,并对扩增产
物测序。再将基因型结果与临床表型进行相关分析。结果 37例标本中检测到12例
有ATP7BArg778Leu突变,其中有9例表现为肝脏症状首发(75%);2例有Thr935Met
MD1基因上没有发现任何能引起密码子和剪切位点改变的突变,检测到
了1个多态性IVS2+63C>G。结论 ATP7B仍是目前唯一确定的WD致病基因,其
Arg778Leu突变与肝脏症状表现为首发症状有关。MD1基因与中国
人群的肝豆状核变性有关。
关键词肝豆状核变性基因基因临床表现

Abstract
Aim To study a cohort of 37 Chinese Han people with Wilson disease to illuminate the
role of ATP7B MD1 in the pathogenesis of WD as well as the influence to
clinical manifestation diversity in WD. Methods The three exons of MD1
gene including the intron–exon boundaries and hot area of ATP7B gene were amplified by
polymerase chain reaction (PCR) and analyzed by direct sequencing. Results Our
study detected ATP7B Arg778Leu mutation in 12 patients, 9 of them show liver symptom
at the onset of disease. Thr935Met were detected in 2 patients. We did not reveal any
mutations leading to an amino acid or splicing site change in MD1 sequence. A
polymorphism at IVS2+63C>G was confirmed. Conclusions There is no evidence to
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华中科技大学硕士学位论文
第二部分
四引物扩增受阻突变体系快速检测病
基因突变

摘要
目的建立一种不需要限制性片段长度多态性或直接测序的新方法检测肝豆状核变
性(WD)病人突变热点 ATP7B 基因的 Arg778Leu突变基因型。方法用四引物扩
增受阻突变体系聚合酶链反应(Tetra-primer amplification refractory mutation
system-PCR, tetra -primer ARMS-PCR)检测中国 37 例 WD 患者和 30 例正常对照的
ATP7B 基因 Arg778Leu 突变,并用测序进行验证。结果 37 例 WD 患者中检出
Arg778Leu 纯合突变 3 例,杂合突变 9 例,总检出率 %(12/37);30 例正常对照
未发现突变;DNA 测序结果与四引物 ARMS-PCR 结果完全一致。结论 ATP7B 基
因 Arg778Leu突变是中国人 WD 突变热点;四引物 ARMS-PCR 法适用于 Arg778Leu
突变检测,有快速、简便、准确的优点,可以区分等位基因是纯合子或杂合子,易于
大量本的人群筛查。
关键词肝豆状核变性;四引物扩增受阻突变体系;基因诊断

Abstract
Aim The aim of this study was to establish a new method for genotyping ATP7B
Arg778Leu gene mutation that does not require RFLP PCR or sequencing. Design and