文档介绍：扬州大学
硕士学位论文
鸡胚原始生殖细胞体外培养及其诱导分化的研究
姓名:蔡琳琳
申请学位级别:硕士
专业:动物遗传育种与繁殖
指导教师:李碧春
20050501
鸡胚原始生殖细胞体外培养及其诱导分化的研究中文摘要研究生:祭琳琳本研究采用密度梯度离心法提取发育至第期和第期鸡胚胎性腺中一种诱导分化剂在不同培养时间以及不同诱导分化剂在同一培养时间等方泫定向诱导向神经元样细胞分化,并通过体外悬浮培养等方式探讨定向诱导甈掷胩岽亢螅谝訢;∫海砑サ奶ヅQG濉%的鸡劝滨=骸/K崮啤./硫酸庆大霉索、以鸡胚成纤维细胞作饲养层的培养体系中培养,可贴壁,并聚集增殖,形成典型的鸟巢状克隆,传至第珹染色为阳性。表明在这种培养体系中,培养至第腜员3制湮捶只奶匦浴ǖ代分别培养、螅捎糜盏技廖姿岫云浣定向诱导,,,其导师:李碧春教授扬州大学动物科学与技术学院的原始生殖细胞琍,经过体外培养、传代后,利用同分化的条件及保持发育多潜能性的能力,结果表明:血清、匣掖肌对细乜的毒性作用也随之增加。痬疞/、/、痬猯/
谕恢峙嘌眑’,不同诱导分化体系之间的比较显示:诱导分化剂挠盏挤只Ч詈茫秸咧湮尴灾钜,。诱导产尘的神经元样细腿经组织化学染色,均可见神经元特有的尼氏体结构。诤诘代在以为基础液,添加%的胎牛血谷氨酰胺、/,采用悬浮培养的方式,在未纯化饲养层细胞的情况下,聚集体可以分化成血管样细胞:经差速贴壁去除饲养层后直接悬浮培养,培养后可形成类胚体结构。胚胎原始生殖细胞,体外培养,诱导分化,神经元样细胞其他钟盏挤只恋挠盏夹ЧS盏挤只罥洳钜觳幌灾,清、サ募ρG濉关键词:鸡。类胚体/
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国家自然科学基金项目
文献综述ε咴忌诚赴芯拷的分离提纯的概念、牛⋯图Β璧榷锷弦确定,在孵化的第冖璩鱿衷诿髑南屡卟阒校瓷承略虑居、增殖【,到孵化的第期开始分化,即形成生殖细胞㈣。根据的起殖腺原始生殖细胞珽【。白蚄从延迟着床的小鼠早期胚胎中分离得到细胞后,早期胚胎一直成为分离克隆细胞的唯一来源。直到年,纫愿街埠笮∈筇ザ脑忌诚赴2牧希嘌竦肊赴⑹状比较全面地证实了同样可作为细胞分离克隆的原材料。目前,从取得了重要的进展。越来越多的研究表明,来源于的细胞跟细胞一样,可被用于研究胚胎早期发育和细胞谱系分化,并可对其进行各种遗传操作。由二二者在形态和生物学特性上很相近,所以一般又将它们统称为细胞。是指能够发育为精子或卵子的祖先细胞。最早由在年发现,现有的研究认为,禽类的原始生殖细胞起源于上胚层【”⒃缭诘趚期就已期,出现在血液中,之后通过血液循坏到达生殖嵴部位,并在此处定源、迁移及定居规律,可以从生墒新月区、血液和原始性腺刑崛以进行体外培养、遗传操作、干细胞建系等研究。与槎锵啾龋堇嗟氖芫押写罅康穆鸦疲鳳姆掷氪炕戳较大的困难。由于禽类的胚胎发育中数量较少,常与体细胞混合,在培养时很难大量收集和纯化。目前虽已有不少有关鸡胚纯化的报道¨引,但大多是以密度梯度离心法从血液中提取,所提取的;数量较少,远远不够体外操作具有多向分化潜能的胚胎干细胞有两种来源:一种是来自于早期胚胎囊胚阶段内细胞团的胚胎干细胞珽⋯,另一种是来自于胚胎生琍的胚胎生殖细胞中培养获得细胞,在小鼠⒋笫骹俊⒅怼删、人,在孵化的蔡琳琳鸡胚原始生殖细胞体外培养及其诱导分化的研究
的体外培养、建系的冷冻保存培养的效果与密度梯度离心法的效果无明显差别。根据鸡胚迁移规律,鸡胍原始生蜻腺中相对集中,且已大量增值‘∞墙刑逋馀嘌鳳芎的来源。李碧春等【】比较了三个发育时期鸡在体内聚集情况,结果表明鸡康缺ǖ烂附饫敕ㄓ隖芏忍荻壤胄姆ㄏ啾龋在体外培养的极易发生分化,为了维持未分化状态等生物学特性。人们不断改进的体外培养系统。到目前为止,的培养条件一般以或作为基础培养基,在有饲养层细脆的情况下,添加一定量的胎牛血清、细胞生长因子及氨基酸等物质,研究在这样的培养条件下的生长、增殖特性,以期获得大量的用于体外操作。早期的研究者尝试把从血液或性腺中获取的培养在悬滴中,但由于培养基成分较为简单,并没有观察到的增殖现象。年,等【捣⑾郑迸嘌褐刑ㄓ幸欢康牡鞍锥嗵橇蛩崛砉撬厥保能够良好的生长。年等对从鸡胚盘和生殖新月区获得的进行了长期培养,发现从胚盘中获取的具有增殖和分化能力,但从生殖新月区中获得的却不具有这种能力,出此表明鸡可以在体外长期培养。