文档介绍：哺乳动物胚胎体外生产技术
一、国内外研究现状
早在100多年前就进行过体外受精尝试; 1951年,精子获能现象的发现,是体外受精的里程碑; 50—70年代,实验动物上进行了大量研究,并取得了成功; 80年代以来,由于对胚胎需求量的加大,促进了家畜体外受精的研究,牛、绵羊、山羊、猪等相继获得了成功,国内在90年代也在家畜上取得了成功。 现已将卵母细胞体外成熟—体外受精—早期胚体外发育,甚至冷冻保存结合在一起,建立工厂化生产胚胎的成套技术,以大量生产质优价廉的胚胎。
二、卵巢卵母细胞的获得与体外成熟培养
(一)卵巢卵母细胞的获得
1. 活体卵巢上采集 母畜超排处理后,利用剖腹术或腹腔镜技术已能成功地采集卵泡卵母细胞。
2. 屠宰后卵巢上采集 (1)卵巢的采集与保存:宰后立即无菌采集, 30--37度灭菌生理盐水中6H内运回实验室。 (2)卵巢表面卵泡细胞的获得 1)抽取法:18号针头;最常用; 2)剥离法: 3)切开法:
3. 卵巢内卵泡卵母细胞的获得 数量多,用一组特制刀片对卵巢组织进行深部切割,采卵率约提高1倍。
(二)卵母细胞的筛选
只有周围包被着完整卵丘(A级)或部分卵丘脱落(B级)、胞浆均质并充满于透明带内的卵母细胞才能进行成熟与胚胎发育的培养。