文档介绍：人类Y染色体SRY基因的鉴定
一、实验原理 
SRY基因是Y染色体上具体决定生物雄性性别的基因片段。通过PCR扩增技术，对SRY基因进行扩增，可以以此来快速鉴定性别。PCR由变性→退火(复性）→延伸三个基本反应步骤构成。：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合，若引物1与1链配对延伸，则引物2需与2链配对延伸；：DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下，于72℃左右，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对原则与半保留复制原理，合成一条新的、与模板DNA链互补的半保留复制链并重复循环变性—退火—延伸三过程，最终获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。1～3小时时间就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
琼脂糖凝胶电泳是利用不同分子量的DNA在琼脂糖凝胶电泳中电泳速度不同而分离DN***段的方法。琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要依据它们的相对分子质量及分子构型，同时与琼脂糖的浓度也有密切关系。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。在凝胶中，DN***段（小于20kb）迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与扩增片段的移动距离进行比较，可检测已知片段是否存在，也可测出未知片段的大小。此方法结果观测简便，灵敏度较高，而且分离出的DNA可以切胶回收，是现在PCR反应后最常用的检测方法。
实验目的   
掌握PCR反应的基本原理和实验操作
掌握利用琼脂糖凝胶电泳法对条带进行鉴定的方法和实验操作
实验材料、试剂及仪器 
实验材料  男性的口腔上皮细胞及头发毛囊细胞、女性的口腔上皮细胞及头发毛囊细胞
实验试剂  NaOH溶液、 HCl溶液、PCR混合液、10μmol/L SRY引物1、10μmol/L SRY引物2、 无菌水、琼脂糖、1×TAE缓冲液、核酸染料、DNA标样简称marker等
仪器  各种规格微量移液器和枪头、PCR管、配胶板、PCR仪、电泳仪、离心机、凝胶成像系统、电子称、药勺、称量纸、其他各种玻璃器材
实验准备
 SRY引物1和SRY引物2设计：可从NCBI网站搜索该基因相关的文献以获得引物序列；也可根据NCBI上该基因的碱基序列，借助引物设计软件如Oligo等进行设计，再由引物合成公司合成相关引物。
扩增人的SRY基因，所用引物为： 
SRY1：5’-TGG GAC TGG TGA CAA TTG TC-3' 
SRY2：5’-GAG TAC AGG TGT GCA GCT CT-3'
模板DNA的制备
（1）男生口腔粘膜上皮细胞或毛发数根，女生口腔粘膜上皮细胞或毛发数根作为对照。
 （2）剪下带毛囊的发根部分，放入一个200μl PCR管，加20μl的0.