文档介绍：第三军医大学
博士学位论文
内质网应激介导糖皮质激素免疫刺激作用及其分子机制
姓名:钟河江
申请学位级别:博士
专业:外科学(野战外)
指导教师:蒋建新
20090501
内质网应激介导糖皮质激素免疫刺激作用及其分子机制摘要感染是严重创伤常见并发症,目前对其救治仍缺乏有效的措施。因此,在创伤早期预防和治疗损伤诱发的器官功能不全具有十分重要的意义。创伤可导致免疫反应异常,而这与创伤后严重感染易感性增加有关。神经内分泌反应是创伤后最早出现的一种机体反应。大量研究表明神经内分泌系统对免疫功能具有重要的调控作用。严重创伤后,。糖皮质激素珿荋轴的最终效应激素,对免疫系统具有重要调控作用。因哂泄惴憾匾5拿庖咭种铺匦裕涣俅采献为抗炎药物。大量研究表明,除了免疫抑制作用外,内源性或天然部刹庖刺激作用。本课题组前期研究表明一定剂量的内源性皮质酮稍銮烤奘上赴疫功能。然而,对于庖叽碳ぷ饔玫幕粕胁磺宄内质网是参与钙调节和蛋白折叠的一种重要细胞器,对维持细胞内稳态十分重要。一旦内质网内稳态受各种应激干扰而发生紊乱,新合成的未折叠蛋将在内质网腔内蓄积,诱发内质网应激,。为应对蓄积的未折叠蛋白,哺乳动物细胞可触发一种特异的适应性反应,即未折叠蛋白反应,,訣时细胞恢复,以及活跃的分泌细胞缑庖呦赴的功能与存活相当重要。巨噬细胞广泛分布于哺乳动物组织,在天然免疫和获得性免疫中起重要作用。近年来研究发现免疫细胞发生谙赴δ艿骺刂衅鹬匾W饔茫缈乖提呈、浆细胞分化、抗体生成以及赴钥乖从Φ取A硗猓灿写罅垦芯勘砻鱁与免疫炎症反应关系密切。喙氐淖B家蜃覺盒结合蛋白珹在盏枷赴δ变化中具有重要作用。然而,跃奘上赴鸈的影响及其与庖叽碳ぷ饔的关系目前尚未明确。基于本课题组前期研究发现及目前研究现状,我们推测赡茉诮榈糋免疫刺激中具有重要作用。由此,本课题主要围绕庖叽碳ぷ饔糜朊庖呦赴鸈的关系及其可能的分子机制,分别从四个方面进行了系统研究:τ貌煌ǘ饶谠性皮质酮硇∈蟾骨痪奘上赴鄄霦相关分子虯瑇和激活转录因子第二军医大学博士学位论文
/皿,是嶙表达变化,首先明确跃奘上赴鸈的诱导作用。为了进一步阐明朊庖功能变化之间的关系,我们观察了盏技炼竞懿匪囟孕∈蟾骨痪奘上赴庖吖能的影响。此外,对庖咭种谱饔糜隕的关系进行了研究。τ胏基因敲除小鼠,观察急性束缚应激后峄钚远悦庖呦赴鸈的影响及其与免疫功能变化的关系。τ寐《窘榈嫉腞干扰技术,通过选择性沉默小鼠基因,观察在低浓度皮质酮免疫刺激中的作用。τ肎卓辜罵,观察低浓度皮质酮诱导隚墓叵怠Mü鲜鱿低承匝芯浚魅稥介导庖叽激的作用及其分子机制,为深入阐明神经内分泌系统对免疫功能的调控提供实验依据。主要结果如下:捌谘芯刻崾镜团ǘ菺对巨噬细胞有免疫刺激作用。为了检测盏夹鼠腹腔巨噬细胞内质网应激的作用,以及明确诘团ǘ菺诱导免疫刺激中的作用。我们应用不同浓度皮质酮龀荻锏闹饕D谠葱訥硇∈蟾骨痪奘上赴为了进一步明确刖奘上赴庖弑浠涞墓叵担颐枪鄄炝薊诱导剂毒胡萝卜素对巨噬细胞免疫功能的影响。结果显示,与低浓度皮质酮的免疫刺激作用一样,毒胡萝卜素可增强巨噬细胞趋化、吞噬功能及產生成。并且,高浓度皮质酮蝝对碳さ男∈,是应激时神经内分泌反应的中枢性协调分子。为了进一步检测轴活性对免疫细胞挠跋旒捌溆朊庖吖δ鼙浠墓叵怠N颐怯τ肅基因敲除小鼠,观察在心理应激坑竺庖呦赴鸊、和的表达及免疫功能的变化。结果显示,与,⑹笙啾龋珻“虲“琂、鼠在急性束缚应激后,免疫细胞膍偷鞍妆泶锼骄灾黾樱保补鄄斓疿虯藕抛5纪芳せ睿⑶遥⑾钟隒∈笙啾龋珻“埃∈蟾骨痪奘上赴拿庖吖δ芫灾銮俊鄄炝薠贕调控巨噬细胞功能中的作用,通过构建并筛选小鼠基因的扇怕《驹靥澹τ肵畇慢病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞,选择性失活基因,发现低浓度皮质酮,叫荒茉銮啃∈蟾骨痪奘上赴耐淌观察辗的作用,同时,检测藕磐分辛礁鲋匾5淖B家蜃覺和的表达。结果发现,低浓度皮质酮蝝诱导小鼠腹腔巨噬细胞保杉せ頤,并且观察到水发生剪接和蛋白分解。第三军医大学博士学位论文
瓽的活性主要是由糖皮质激素受体,榈肌R虼耍我们观察了在低浓度皮质酮诱导巨噬细胞械淖饔谩=峁允荆τ肎抗剂ご砭奘上赴芟灾匾种频团ǘ绕ぶ释蜪诱导的及蛋白表达水平的增加。此外,应用瓒螱懿糠忠种频团ǘ团ǘ绕ぶ释?捎盏季奘上赴鸈,激活S氲团ǘ绕ぶ释2拿庖刺激作用相似,毒胡萝卜素诱导巨噬细胞内质网应激也具有免疫刺激作用。庖抑制作用也与泄亍W苤庑┙峁砻鞯团ǘ绕ぶ释6跃奘上赴庖叽碳ぷ饔可能与诱导细胞内喙亍识菻轴活化可诱导免疫细胞銮棵庖呦赴δ堋R蚨诱逅证实内源性庖叽碳ぷ饔每赡苡胗盏济庖呦赴鸈有关。甔诘骺氐团ǘ绕ぶ释C庖叽碳ぷ饔弥芯哂兄