文档介绍：《药品生产质量管理工程》学院:化学科学与工程学院专业:无机化学姓名:袁晓红学号: ********** 高效液相色谱仪( HPLC )的验收、使用及维护摘要: 高效液相色谱仪在许多领域应用日益广泛,又因为它主要靠进口,价格比较昂贵,所以它的使用和维护显得十分重要。本文阐述了从购买到安装、检测高效液相色谱仪的操作步骤及高效液相色谱仪的系统组成、各部件的功能和工作原理以及在使用过程中应注意的问题,注意维护从而达到节约仪器耗材、延长仪器使用寿命的目的。关键词: 高效液相色谱仪;验收;使用;维护高效液相色谱仪它是在经典液相色谱的基础上,引入气相色谱的理论和技术而发展起来的。在高效液相色谱中,流动相与组分之间有一定的亲和力,分离过程的实现是组分、流动相和固定相三者间相互作用的结果,分离不但取决于组分和固定相的性质,还与流动相的性质密切相关,一般情况下,高效液相色谱仪的分析可在室温下进行,由于采用颗粒极细的固定相,柱内压降很大,加上流动相黏度高,因此必须采用高入口压,以此来维持一定的流动相线速。高效液相色谱仪对于挥发性低、热稳定性差、分子量大的物质特别有利,它在医药、生化等方面具有非常重要的作用。 1. 高效液相色谱仪的结构和原理高效液相色谱仪主要贮液器、脱气器、高压泵、进样器、色谱柱和检测器等组成。高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论。在技术上,流动相改为高压输送:色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成, 从而使柱效大大高于经典液相色谱;同时连接有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续精确地检测。其工作原理如下:首先储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱内,由于样品溶液中的各组分在流动相和固定相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附一解吸的分配过程,各组分在固定相中的滞留时间有长有短,从而,按先后不同顺序从固定相中流出,通过检测器时,样品浓度被转换成信号传送到记录仪,数据通过以谱图等形式记录下来。 2. 高效液相色谱仪的验收仪器验收是一项很细致的工作。仪器验收的目的是检查外商提供的商品是否达到了它的性能指标。一台高效液相色谱仪到货后,首先要组织一个精悍的验收小组,由液相色谱专家、应用技术人员、电气技术人员和器材部门的代表组成。应准备专用的记录本、详细记载验收过程中的原始记录。整过程分数量验收、外观检查和质量验收三步。即首先俭查货物装箱单上所开列的物件与原订货合同是否相符、核对无误后对主机和各零部件进行外观检查,仪器经过长途运输和装卸、难免有叩碰、如果防震、耐压的包装完善的话、是可以完好无损地到达用户手中的。若发现包装破损就要注意仪器有否受损,特别对那些精密光学部件和光源有否发生位移和破碎。仪器如无缺损、外观完好、则在仔细阅读使用说明书后即可开始质量( 或性能)验收的工作。高效液相色谱仪的主要部件有高压泵、进样阀、色谱柱、检测器、记录器和梯度装置等。先进行单机检查、然后再联机测试单机检查是指脱开其他连接部件、单独对某一组件进行检查。然后对整个系统联机测试。高压输液泵主要检查其压力和流量能否达到规定的指标。例如,指标规定该高压泵可达最高压力 500 公斤/厘米 2“则在泵出口处接一堵头,观察泵压是否可达 500公斤/ 厘米 2“, 系统的所有接头处有否渗漏象, 泵密封垫圈是否可靠地工作。目前. 高压泵的流量范围一般为 - 毫升/分,须检查流量精密度和重复性。流量精密度是指在设定流量条件下与实测流量是否相符,方法是用精密量筒和停表测定单位时间的流量,一般,在最低或最高流量条件下客易偏离原设定流量。所谓重复性是指在不同情况下(如空载和不同柱压降)流量的变动。这里要注意的是大多数泵的压力、流量指标分两档,即流量 5毫升/ 分以下最高压力为 500公斤/厘米 2, 5一毫升/分的最高压力为 250 公斤/厘米 2,不能要求在高流量条件下达到最高压力。检测器紫外吸收检测器包括单波长和可变波长两类。需要检查以下几项, ①噪音和漂移将灵敏度放在最高档程, 分别在静态和动态条件下( 即没有或有流动相通过检测池)测定基线的噪音和漂移(图 1),并同指标比较。②稳定性检测器连续工作 12小时或 24小时,观察基线噪音和漂移的情况。③灵敏度自检(以 LD C公司 1203 单波长紫外检测器为例) 将档程(RANGE) 放在位置, 选择开并(ZERO/CHE CK) ,放在 CH-ECK , 记录器应偏转满标的 50% 。换句话说, 从电气线路给出土 AU 的偏转值,看记录器指示是否相应偏转满标的 50%。④动态线性范围随着样品量的改变,检测器有一个线性响应的范围(图2)