文档介绍：实验三聚合酶链式反应(PCR)体外扩增DNA
一、实验目的
通过本实验学****PCR反应的基本原理与实验技术。
二、实验原理
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR),模拟体内DNA复制过程,在体外快速扩增特定基因或DNA序列的一种技术,故又称为基因的体外扩增法。
以单链DNA为模板,4种dNTP为底物,在模板3 ´端有引物存在的情况下,酶催化互补链的延伸,经变性、退火和延伸多次反复循环能使微量模板DNA大量扩增。产物DNA量按2n方式扩增。
理论上经30次的循环反应,DNA扩增倍数为106~109
PCR循环步骤
:加热使模版DNA双螺旋的氢键断裂,形成单
链DNA。
:降低温度,寡核苷酸引物与单链模板互补结
合,形成DNA模板-引物复合物。
:从结合在DNA模板上的引物为出发点,在Taq
DNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,按
碱基配对与半保留复制原理,合成一条与模
板DNA链互补的新链。
3’
5’
5’
3’
高温变性
低温退火
中温延伸
不断循环
聚合酶链式反应示意图
目的片段
模板
引物对
3’
5’
5’
3’
(c)
(b)
引物2
5’
3’
3’
3’
5’
5’
(d)
新引物
5’
3’
靶DNA的扩增
(a)
5’
3’
引物1
3’
5’
3’
5’
引物2互补链
引物1互补链
单位长度的链
不同长度的链
5’
3’
3’
5’
引物1互补链
引物2互补链
目的片段(不同长度的链未示出)
聚合酶链式反应示意图
(e)
(f)
(g)