文档介绍：实验1:检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
一、可溶性还原糖的检测:
(1)原理:还原糖+ 斐林试剂砖红色沉淀。
(2)选材:苹果、梨、白萝卜。含糖量较高,颜色为白色或近于白色的植物组织。
(3)检测过程:
水浴加热
振荡混匀
50~65℃水浴
加热2min
2mL组织样液
刚配制的斐林试剂2mL
呈现浅蓝色
变成砖红色(Cu2O)
还原糖:葡萄糖、果糖和麦芽糖、乳糖、半乳糖
实验:检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
实验原理:某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。
①还原糖+ 斐林试剂砖红色沉淀
②脂肪+ 苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)染液→橘黄色(或红色)
③蛋白质+ 双缩脲试剂→紫色
④淀粉+ 碘→蓝色
制备组织样液
梨或苹果
研磨
取5g,放入研钵中
洗净、去皮、切块
过滤
滤液
(用单层纱布)
显色反应
向试管中加入2ml组织样液
向试管中加入1ml斐林试剂(甲液和乙液等量混合均匀后再注入)
振荡混匀
50~65℃水浴加热2min
观察现象
观察溶液颜色变化:浅蓝色→棕色→砖红色
结论:生成砖红色沉淀,说明梨或苹果中含有还原糖。
砖红色的糖(还原糖)非(斐林试剂)常好吃
【斐林试剂用法】:甲液:,乙液: g/mL的CuSO4溶液,
使用前等体积混合均匀,
现配现用。
且需要水浴加热。
二、脂肪的检测
(1)选材:经浸泡去种皮的花生种子。
(2)检测过程:
制片
选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央
制成临时装片:滴12滴蒸馏水,盖上盖玻片
染色:在薄片上滴加23滴苏丹Ⅲ染液,染色23min
洗去浮色:用吸水纸吸去染液,滴加体积分数为50%的酒精12滴
镜检观察:在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒,然后用高倍镜观察。
切片:花生种子(浸泡3-4h),去皮,将子叶削成薄片。
视野中有橘黄色颗粒
橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒
脂肪+ 苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)染液橘黄色(或红色)
三、蛋白质的检测:
(1)原理:蛋白质+ 双缩脲试剂紫色络合物
(2)选材:黄豆、鸡蛋清(稀释)、牛奶、豆浆
(3)检测过程:
2 ml组织样液
2 ml双缩脲试剂A液,摇匀
3-4滴双缩脲试剂B液,摇匀
观察颜色变化
紫色
无色
紫色
(创造碱性条件)
(提供Cu2+)
双缩脲试剂B 3-4滴
双缩脲试剂A 2mL
2mL组织样液
原理:在碱性条件(NaOH)下,蛋白质中的肽键(—NH—CO—)与Cu2+作用生生紫色络合物。因此,操作时,应先加A再加B