荧光素酶报告基因实验自我总结.docx

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荧光素酶报告基因实验自我总结
实验原理：
目前由两个主要的应用方向：
第一是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用，转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，精品文档
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荧光素酶报告基因实验自我总结
实验原理：
目前由两个主要的应用方向：
第一是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用，转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子
中的特异顺序结合，这些特异性的序列被称为顺式因子，转录因子的 DNA结合域和顺式因子
实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（ luciferase
Assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。
第二是研究微小 RNA(microRNA)对于靶基因的调控， 通过生物信息学方法预测 microRNA潜
在的靶基因以及干预位点序列， 并设计合适的 microRNA质粒或干预片段， 同时构建靶基因的
报告基因质粒，二者同时转染细胞，这是确定 microRNA是否能影响（上调或下调）靶基因的
首选研究 方法。
实验流程：
1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如
pGL3-basic（转录因子与靶基因） 或pMIR-REPORTLuciferase质粒（微小RNA与靶基因）
2）将要检测的转录因子表达质粒（或 microRNA质粒）与报告基因质粒共转染 293细胞
或目的细胞。如果此转录因子（或microRNA）能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。
3）加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光素，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作