文档介绍：293T荧光素酶报告基因实验
在研究转录因子和启动子的实验中，你是否想确定结合位点的序列？
这些问题都可以用双荧光素酶报告基因检测系统来尝试解决。
双荧光素酶报告基因检测系统介绍基于荧光素酶(luciferase )的发光原理，科学293T荧光素酶报告基因实验
在研究转录因子和启动子的实验中，你是否想确定结合位点的序列？
这些问题都可以用双荧光素酶报告基因检测系统来尝试解决。
双荧光素酶报告基因检测系统介绍基于荧光素酶(luciferase )的发光原理，科学家发明了双荧光素酶报告基因检测系统。该系统包括萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase )和海肾荧光素酶
(Renilla luciferase )。两者可催化各自的底物发生氧化作用产生生物荧光，产生的荧光数值大小即表示了两种酶的表达量多少。Firefly luciferase和 Renilla luciferase之所以被称为报告基因，是因为在基因表达调控研究时，利
用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。
具体做法是：将靶基因的转录调控元件或5'启动子区克隆在
Firefly luciferase基因的上游，或把3' -UTR区或IncRNA结合序列克隆在
Firefly luciferase基因的下游，以研究启动子的强弱和转录因子对启动子的作用或miRNA对目的基因或lncRNA的调控作用(见图2)。与此同时，引入包含Renilla luciferase基因的TK载体作为内参，以便消除细胞转染等因素带
来的组间误差。
双荧光素酶报告基因检测系统中的luciferase来源于细菌、萤火虫、发光海洋生物等，可以在哺乳细胞中直接表达，无需表达后修饰，直接具备完全酶活
性。与绿色荧光蛋白（GFP ）不同，它们的发光检测不需要激发光激发，且发光穿透力更强，这使其具备可定■、高灵敏度及低背景等特点。
双荧光素酶报告基因检测的应用
下面从实验方案设计、实验数据处理及结果分析几个方面介绍几个案例，供大
1、利用双报告
检测系统研究miRNA与3 UTR的相互作用
实验目的：验证大鼠miR-1与靶基因ATG13 3' UTR是否发生作用，并进• 步确定miR-1与ATG13 3' UTR的作用位点。
实验方案：构建luc-3' -UTR-WT载体和luc-3' -UTR-mut载体，将其与海肾载体及miRNA mimics共转染293T细胞，转染24-48h后使用双荧光素酶报告基因检测系统（翊圣产品货号：11402ES ）检测。
实验分组：
实验结果:
Luc-3' UTR-WT + mimics-NC
Luc-3' UTR-WT + mimics-miR-1
Luc-3' UTR-mut + mimics-NC
Luc-3' UTR-mut + mimics-miR-1
实验分组
Luc值（均值）
Ren值（均值）
Luc-NC + mimics-NC
185214
32007
Luc-NC + mimics-miR-1
174577
30016
Luc-3' UTR-WT + mimics-NC
186580