文档介绍：293T荧光素酶报告基因实验
在研究转录因子和启动子的实验中，你是否想确定结合位点的序列?
这些问题都可以用双荧光素酶报告基因检测系统来尝试解决。
双荧光素酶报告基因检测系统介绍
基于荧光素酶(luciferase )的发光原理，科293T荧光素酶报告基因实验
在研究转录因子和启动子的实验中，你是否想确定结合位点的序列?
这些问题都可以用双荧光素酶报告基因检测系统来尝试解决。
双荧光素酶报告基因检测系统介绍
基于荧光素酶(luciferase )的发光原理，科学家发明了双荧光素酶报告基因检测系统。该系统包括萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase )和海肾荧光素酶
(Reni Ila luciferase )。两者可催化各自的底物发生氧化作用产生生物荧光产生的荧光数值大小即表示了两种酶的表达量多少。 Firefly luciferase 和
Reni Ila luciferase 之所以被称为报告基因，是因为在基因表达调控研究时，利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是：将靶基因的转录调控元件或 5 '启动子区克隆在
Firefly luciferase基因的上游，或把3' -UTR区或lncRNA结合序列克隆在
Firefly luciferase基因的下游，以研究启动子的强弱和转录因子对启动子的作用或miRNA对目的基因或lncRNA的调控作用(见图2)。与此同时，弓I入包含Ren ilia luciferase基因的TK载体作为内参，以便消除细胞转染等因素带来的组间误差。
双荧光素酶报告基因检测系统中的luciferase来源于细菌、萤火虫、发光海洋
生物等，可以在哺乳细胞中直接表达，无需表达后修饰，直接具备完全酶活
性。与绿色荧光蛋白（GFP）不同，它们的发光检测不需要激发光激发，且发光穿透力更强，这使其具备可定量、高灵敏度及低背景等特点。
双荧光素酶报告基因检测的应用
下面从实验方案设计、实验数据处理及结果分析几个方面介绍几个案例，供大豕参考。
1、禾I」用双报告基因检测系统研究 miRNA与3 ' UTR的相互作用
实验目的：验证大鼠miR-1与靶基因ATG13 3' UTR是否发生作用，并进一步确定miR-1与ATG13 3 ' UTR的作用位点。
实验方案：构建luc-3 ' -UTR-WT载体和luc-3 ' -UTR-mut载体，将其与海肾载体及miRNA mimics 共转染293T细胞，转染24-48h后使用双荧光素酶报告基因检测系统（翊圣产品货号：11402ES ）检测。
实验分组：
a Luc-NC + mimics-NC
b Luc-NC + mimics-miR-1
Luc-3 ' UTR-WT + mimics-NC
Luc-3 ' UTR-WT + mimics-miR-1
Luc-3 ' UTR-mut + mimics-NC
Luc-3 ' UTR-mut + mimics-miR-1
实验结果:
实验分组
Luc值（均值）
Ren值（均值）
Ratio （均值）
Luc-NC + mimics-NC
185214
32007

Luc-NC +