文档介绍：实验二酶联免疫吸附试验
实验目的
了解ELISA反应原理、类型及特点
掌握直接ELISA操作步骤
通过实验认识抗体的双重性
实验原理
抗原或抗体能物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和 聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，吸附实验二酶联免疫吸附试验
实验目的
了解ELISA反应原理、类型及特点
掌握直接ELISA操作步骤
通过实验认识抗体的双重性
实验原理
抗原或抗体能物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和 聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，吸附后的抗原或抗体仍保持 其免疫学活性。
酶可与抗体通过共价键连接而形成酶标记抗体，这种结合作用 并不影响抗体的免疫学活性和酶的催化活性。
酶标抗体中的酶可催化无色底物形成有色产物，酶标抗体与相 应抗原或抗体结合后，可根据有无颜色反应来判定是否有免疫反应发 生，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比，因 此，可以按底物显色的程度来显示试验结果。
实验器材及试剂
3. 1器材
微量移液器，酶标仪、洗板机、96孔酶标板、PHSJ-4A型pH计
3. 2试剂
显色剂(TMB)、兔抗鸡IgG-HRP,牛血清白蛋白(BSA)、
Tween-20、标准品鸡IgG
3. 3各种缓冲液
包被液(0. 05 M碳酸盐缓冲液，pH )
0. IM Na2C03 1. 59 g, 0. IM NaHC03 2. 93 g,加 DDH20 (DDW) 至1 L,用精密pH计调整pH值到9. 6；
封闭液
3%BSA, 3g BSA 溶于 100 mL PBS 中，调整 PH 7. 4；
洗涤及稀释液PBST和PBS (PH 7. 4)
0. Olmol/L PBS 缓冲液
NaCl g, KCL g, Na2HP04 12H20 g KH2P04 0. 272g溶于WOOmL蒸僧水，调整pH至7. 2,高温高压灭 菌。IL PBS (pH 7. 2)中加入 0. 5mL Tween-20 配制成 PBST。
封闭液
称取 0. 1 g BSA 溶于 100 mL PBST 中；
(5)底物 Buffer
称取7. 16 gNa2HP04 - 12H20溶于100 mL去离子水中，量取25. 7 mL于100 mL容量瓶中；再称取2. 1 gC6H807 H20溶于100 mL去离 子水中，量取24. 3 mL于容量瓶中；再加约50 mL去离子水定容，并 。
TMBI作液
底物A： TMB 40mg,无水乙醇或DMS0 10 mL；
底物B： 250 uL的A溶液，加10mL底物Buffer,临用加20 n L H202；
最好现用现配。Substrate A,B液必须4°C,避光保存。
终止液
2M H2S04：浓 H2S04 20 ml,加水至 180 mL；
酶标抗体
兔抗鸡IgG-HRP,用PBST稀释；4°C保存30 d；
操作步骤
抗原包被
在酶标板上包被稀释好的标准鸡IgG,每孔加100 nL,