文档介绍：《现代仪器分析》
第3章高效液相色谱
Chapter3 High Performance Liquid Chromatography,
HPLC
Contents
1 第一节 HPLC的特点及基本理论
2 第二节高效液相色谱法的类型及原理
3 第三节高效液相色谱仪
4 第四节其他现代分离技术简介
§§ HPLC的特点及基本理论HPLC的特点及基本理论
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第一节高效液相色谱法的特点及基本理论
★教学目标
区别
★重点与难点
2. HPLC基本理论及条件选择
一、液相色谱理论发展简况
什么是高效液相色谱法?
高效液相色谱法:以气相色谱为基础,在经典液相色谱实
验和技术基础上建立的一种液相色谱法。又称现代液相色
谱。
色谱法的分离原理
溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相
(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)
的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相
中流出。又称为色层法、层析法。
一、液相色谱理论发展简况
①色谱法最早是由俄国植物学家茨维特(Tswett)在1906年研究用碳酸钙
分离植物色素时发现的,色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基
础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
②液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差
输送流动相,称为经典液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个
小时)。
③高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)
是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速
发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具
有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱
法(High Pressure Liquid Chromatography,HPLC)。又因分析速度快而
称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography,HSLP)。也称
现代液相色谱。
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一、液相色谱理论发展简况
茨维特实验动画
二、高效液相色谱的特点
“三高”“一快”“一广”
高压——压力可达150~300 atm。色谱柱每米降压为75 atm以上。
高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——。同时消耗样品少。
快速——~ ml/min。
例如:
分离苯的羟基化合物,7个组分只需1min就可完成。
对氨基酸分离,用经典色谱法,柱长约170cm,柱径
,流动相速度为30cm3·h-1,需用20多小时才能分
离出20种氨基酸;而用高效液相色谱法,只需lh之内即
可完成。
应用范围广——可分析80%有机化合物
三、高效液相色谱和经典LC的区别
项目经典LC HPLC
方法功能分离分离+分析
柱内径 1~3cm 2~6mm
固定相粒径>100μm <10μm
输送流动相的压力常压高压
柱效低高
分析周期长短
在线检测不能能
想一想:HPLC的粒径小,为什么柱效就高?
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四、HPLC和GC的区别
9 相同:兼具分离和分析功能,均可以在线检测
9 主要差别:分析对象的差别和流动相的差别
GC
能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品,占有机物的20%
高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测
HPLC
溶解后能制成溶液的样品,不受样品挥发性和热稳定性的限制, 分子量大、
难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测;
用途广泛,占有机物的80%
四、HPLC和GC的区别
2。流动相的区别
GC 想一想:GC流动相的惰性气体有?常用的净化
剂有哪些?
惰性气体
组分与流动相无亲和作用,只与固定相作用;
HPLC
液体
流动相与组分间有亲合作用力,为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素,对
分离起很大作用
流动相种类较多,选择余地广(可为水溶液、有机溶剂、极性/非极性化合物)
流动相极性和pH值的选择也对分离起