文档介绍：第十三章高效液相色谱法 HPLC
第一节概述
high performance liquid chromatography
一、HPLC与经典LC区别
二、HPLC与GC差别
三、高效液相色谱仪流程图
四、特点
以气相色谱理论为基础,在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法
一、HPLC与经典LC区别
主要区别:固定相差别,输液设备和检测手段
:仅做为一种分离手段
柱内径1~3cm,固定相粒径>100μm 且不均匀
常压输送流动相
柱效低(H↑,n↓)
分析周期长
无法在线检测,灵敏度差
:分离和分析
柱内径2~6mm,固定相粒径<10μm(球形,匀浆装柱)
高压输送流动相
柱效高(H↓,n↑)
分析时间大大缩短
可以在线检测,灵敏度高
表 20-1 HPLC法与经典LC法性能对比
经典LC HPLC
固定相一般规格特殊规格
固定相粒度(μm) 75~500 3~10
粒度分布(RSD) 20~30% <5%
柱长(cm) 10~100 3~25(分析型)
柱内径(cm) 2~5 ~
柱入口压强(MPa) ~ 2~40
柱效(理论塔片数/m) 10~100 3×104~8×104
样品用量(g) 1~10 10-6~10-4
分析所需时间(h) 1~20 ~
装置非仪器化仪器化
12/1/2017
二、HPLC与GC差别
相同:兼具分离和分析功能,均可以在线检测
主要差别:分析对象的差别和流动相的差别

GC:能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品,
高沸点、热稳定性差、离子型等样品不可检测
占有机物的20%
HPLC:溶解后能制成溶液的样品,
不受样品挥发性和热稳定性的限制
分子量大、难气化、热稳定性差及高分子
和离子型样品均可检测
用途广泛,占有机物的80%
续前

GC:流动相为惰性气体
组分与流动相无亲合作用力,只与固定相作用

HPLC:流动相为液体
流动相与组分间有亲合作用力,为提高柱的选择性、
改善分离度增加了因素,对分离起很大作用
流动相种类较多,选择余地广
流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用
选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相
可以增大分离选择性

GC:加温操作
HPLC:室温;高压(液体粘度大,峰展宽小)
三、高效液相色谱仪流程图

(滤棒,可滤去颗粒状物质)
(输液泵)

——分离
——分析

续前
四、HPLC的特点和应用
“三高”“一快”“一广”
高柱效——n=104片/米,柱效高(远高于一般LC)
高灵敏度
高选择性
分析速度快
应用范围广泛(可分析80%有机化合物)
第二节基本理论和条件选择
热力学理论:塔板理论——平衡理论
动力学理论:速率理论——Vander方程
一、塔板理论
二、速率理论
三、HPLC法中分离条件的选择
基础
一、塔板理论
二、速率理论(与GC对比)
1.